공초점형광현미경의 기본 구조
(1) 스캐닝 모듈
스캐닝 모듈은 주로 핀홀 라이트 바(광 슬라이스의 두께 제어), 분광기(파장에 따라 빛의 진행 방향 변경), 방출 형광 색도계(특정 파장 범위 내의 빛을 선택하여 감지), 검출기(광전자 증배관). 형광 샘플의 혼합 형광은 스캐너에 들어가고 감지 핀홀 라이트 바, 분광계 및 비색계에 의해 선택된 후 다양한 단색 형광으로 나누어지며, 이는 서로 다른 형광 채널에서 감지되어 해당 공초점 이미지를 형성합니다. 동시에 여러 개의 평행한 단색 형광 이미지와 그 합성 이미지를 컴퓨터 화면에 표시할 수 있습니다.
(2) 형광현미경 시스템
현미경은 시스템의 이미징 품질과 관련된 LSCM의 주요 구성 요소입니다. 현미경 광학 경로는 이미징 품질과 측정 정확도에 영향을 주지 않고 광학 옵션을 사용하여 무한히 먼 광학 시스템에 쉽게 삽입할 수 있습니다. 대물렌즈는 큰 개구수 플랫 필드 아포크로매틱 대물렌즈여야 하며, 이는 형광 획득 및 선명한 이미징에 도움이 됩니다. 대물렌즈 그룹의 변환, 컬러 필터 그룹의 선택, 스테이지의 이동 조정, 초점면의 메모리 잠금은 모두 컴퓨터에 의해 자동으로 제어되어야 합니다.
레이저 스캐닝 공초점 현미경에 사용되는 형광현미경은 일반적으로 기존의 형광현미경과 동일하지만 고유한 특성이 있습니다. 레이저가 현미경 대물렌즈에 들어가 샘플을 조사하고 생성할 수 있도록 스캐너에 연결해야 합니다. 샘플에서 방출된 형광이 검출기에 도달합니다. 수은램프를 레이저로 변환하는 광경로변환장치가 필요하며, 수은램프의 광량을 조절할 수 있다.
(3) 일반적인 레이저
레이저 스캐닝 공초점 현미경에 사용되는 레이저 소스에는 단일 레이저와 다중 레이저 시스템이 있으며 일반적으로 사용되는 레이저에는 다음 세 가지 유형이 있습니다.
반도체 레이저: 405nm(자외선 스펙트럼 근처)
아르곤 이온 레이저: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm(청녹색광)
He-Ne 레이저: 543nm(녹색광 He-Ne 녹색 레이저) 633nm(적색광 He-Ne 적색 레이저)
UV 레이저(UV 레이저): 351 nm, 364 nm(자외선)
(4) 보조 장비
공냉식, 수냉식 냉각 시스템 및 조정된 전원 공급 장치.
레이저 스캐닝 공초점 현미경의 기본 작동 원리는 먼저 레이저에서 특정 파장의 여기광을 방출하는 것입니다. 증폭 후 빛은 스캐너의 조명된 핀홀 라이트 바를 통과하여 점 광원을 형성합니다. 대물 렌즈는 샘플의 초점면에 초점을 맞추고 샘플의 해당 조명 지점이 여기되어 형광을 방출합니다. 감지 구멍 라이트 바를 통과한 후 감지기에 도달하여 컴퓨터 모니터링 화면에 이미지가 표시됩니다. 이러한 방식으로 초점면에 있는 샘플의 각 지점의 형광 이미지에 의해 완전한 공초점 이미지가 형성되며 이를 광 슬라이스라고 합니다.
