조직 블록의 부피에 관한 생물학적 현미경
생물학적 현미경 지금까지 조직과 세포의 X선 미세 절편을 위한 저온 고정, 냉동 초박 절편 및 동결 건조는 일반적인 방법이었습니다. 이 방법의 세부사항은 다음과 같습니다.
생물학적 현미경. 콘덴서가 있는 현미경의 경우 콘덴서를 위아래로 움직여 적당한 밝기를 얻을 수 있습니다. 또한 가변 발광 다이오드의 조리개를 변경하여 적당한 9b 밝기를 얻을 수 있습니다. 빛이 밝으면 콘덴서를 적절하게 높이고 가변 조명의 조리개를 적절하게 확대할 수 있습니다. 빛이 너무 강하면 콘덴서를 적절하게 낮추고 교차광 빔의 조리개를 적절하게 줄일 수 있습니다. 이런 상황에서도 여전히 눈부신 느낌이 든다면, 적절한 필터를 선택하여 콘덴서 아래 브라켓에 올려 놓을 수 있습니다. 이렇게 하면 만족할 만한 밝기를 얻을 수 있습니다. 물론 가변 조리개 크기를 구현하기 위해 콘덴서의 상하 위치를 조정하고 적절한 필터를 선택하는 경험을 얻으려면 일정 기간의 연습이 필요합니다.
생물현미경에서 매우 중요한 문제는 세포를 채취하고 분리하는 과정, 동결건조 및 수지 포매(FD) 후, 초박형 펠릿 동결 후, 동결건조 후 각 부위의 65원소 함량이 매우 주의 깊게 분석해야 하며, 분석할 세포를 절대 손상시키지 마십시오. X선 미세영역 분석에는 많은 단계가 포함될 뿐만 아니라 비용도 많이 들기 때문입니다. 오랜 시간과 여러 단계를 거쳐 분석된 세포가 손상된 세포이거나 죽은 세포라면 잘못된 결론을 내리는 것은 안타까운 일입니다. 예를 들어, 콜라게나제 처리 후 분리된 심근세포는 두 가지 모양을 갖고 있는데, 하나는 긴 막대 모양이고 다른 하나는 둥근 모양입니다. 후자는 세포 분리 중에 손상된 죽어가는 세포입니다.
생물학적 현미경 검사 이 두 가지 유형의 세포에 있는 전해질의 함량과 분포는 매우 다릅니다. 원형 심근세포에서는 Na가 매우 높고 K는 매우 낮으며 선형 가지의 Ca 농도는 매우 높습니다. 다른 분석법으로 확인한 결과, 둥근 세포에서 높은 Na와 낮은 K, 미토콘드리아에서 높은 Ca가 나타나는 것은 세포 분리 과정에서 세포막이 손상되었기 때문임이 입증되었습니다. 세포와 조직의 저온 고정 방법은 먼저 담금질하고 고정한 다음 액체 질소에 보관하는 경우가 많습니다. 담금질 및 고정은 보존 효과에 매우 중요합니다. 살아있는 세포나 신선한 조직에는 물이 풍부합니다. 담금질 시 한제와 직접 접촉하는 세포 또는 조직 부분(특히 액체 질소로 담금질하는 경우)을 먼저 동결하고 고정하여 "껍질"을 형성하여 세포의 중앙 부분이 분쇄되었습니다. 그리고 냉간 고정. 따라서 X-line 미세영역 분석을 하다 보면 큰 세포의 중심에 얼음 결정이 있는 것을 흔히 발견할 수 있습니다. 이를 방지하기 위해 파쇄냉매로는 액체질소보다 녹는점이 높지만 건조도가 낮은 -806c 물질을 사용합니다. 이런 물질은 많지만 가장 간편하고 저렴한 것은 농축 프로판(끓는점 - 42.120c, 녹는점 - 187.10c, 분자량 44.1)이며, 냉각 속도도 가장 빠릅니다. 그러나 단점은 가연성이라는 것입니다.
생물학적 현미경은 근섬유를 특수 프레임에 놓을 수 있습니다. 근육 섬유 수축이 특정 단계에 도달하여 고정해야 할 때 노즐이 즉시 시작되어 액체 프로판을 근육 섬유에 분사하여 담금질하고 고정합니다. 그런 다음 프레임과 함께 근육 섬유를 꺼내 액체 질소에 넣었습니다. 혈구나 분리된 세포가 고정된 경우 먼저 저속으로 원심분리하여 세포를 농축한 후, 열전도율이 좋은 작은 은색 튜브에 세포를 옮겨 액체 프로판에 넣고 동결시켜 고정합니다. 홀 실험실에서 쥐 췌장을 고정할 때 먼저 두 개의 강철 블록을 액체 헬륨(또는 액체 질소)으로 미리 냉각하고 두 개의 구리 블록을 집게로 고정한 다음 췌장 전후에 배치하여 자궁선을 담금질하고 고정합니다. . 조직이나 세포는 냉각 및 고정된 후 장기 보관을 위해 액체 질소로 옮겨질 수 있습니다.
