조직 블록의 부피에 관한 생체현미경
생물학적 현미경 지금까지 저온 고정, 냉동 극박 절편 및 동결 건조는 조직 및 세포 X-선 미세 절편을 위한 일상적인 방법입니다. 이 방법의 세부 사항은 다음과 같이 설명됩니다.
집광기가 있는 생물 현미경의 경우 집광기를 위아래로 움직여 밝기를 조절할 수 있으며 가변광의 조리개도 변경하여 적당한 9b 밝기를 얻을 수 있습니다. 빛이 맑으면 콘덴서를 적절하게 올릴 수 있고 가변 광원의 조리개를 적절하게 확대할 수 있습니다. 빛이 너무 강하면 콘덴서 렌즈를 적절하게 낮추고 교차하는 빛의 조리개를 적절하게 줄일 수 있습니다. 이 경우 여전히 눈부신 느낌이 들면 적절한 필터를 선택하여 콘덴서 아래 브래킷에 놓을 수 있습니다. 이 떡갈나무는 당신을 만족시키는 빛을 얻을 수 있을 것입니다. 물론 콘덴서의 상하 위치 조정, 가변 광학 판독의 구경 크기 조정 및 적절한 필터 선택은 경험을 쌓기 위해 일정 기간의 연습이 필요합니다.
생물현미경에서 매우 중요한 문제는 세포를 채취하여 분리하는 과정에서 동결건조 및 Resin Embedding(FD) 후, 초박형 응집체를 동결한 후, 동결건조 후 각 부분의 65개 원소의 함량이 조심스럽게 다루어야 합니다. 분석할 세포는 손상될 수 없습니다. X선 미세 분석은 많은 단계를 포함할 뿐만 아니라 많은 비용이 들기 때문입니다. 분석된 세포가 오랜 시간과 다단계 처리를 거쳐 손상된 세포이거나 죽은 세포라면 잘못된 결론을 내리는 것은 매우 안타까운 일입니다. 예를 들어 콜라게나제 처리로 분리된 심근세포는 두 가지 형태가 있는데 하나는 긴 막대형이다.
생체현미경 이 두 가지 유형의 세포에서 전해질의 양과 분포는 상당히 다릅니다. Na는 매우 높고 K는 원형 심근 세포에서 매우 낮으며 선충에서 ca의 농도는 매우 높습니다. 다른 분석법으로 확인한 결과, 원형 세포의 높은 Na와 낮은 K, 미토콘드리아의 높은 Ca는 세포 분리 과정에서 세포막의 손상 때문인 것으로 판명되었습니다. 세포와 조직의 얼음처럼 차가운 고정 방법은 일반적으로 담금질 및 고정을 먼저 채택한 다음 액체 질소에 저장하는 것입니다. 담금질 고정은 보존 효과에 매우 중요합니다. 살아있는 세포나 신선한 조직은 수분이 풍부합니다. 담금질할 때 파쇄된 냉매와 직접 접촉하는 세포나 조직의 일부(특히 액체 질소로 담금질할 때)는 종종 먼저 동결되고 고정되어 "쉘"을 형성하여 세포의 중앙 부분이 분쇄 및 냉간 고정. 따라서 X-line micro-area 분석을 할 때 큰 세포의 중심에 얼음 결정이 있는 경우가 종종 발견됩니다. 이를 방지하기 위해 액체질소보다는 융점이 높지만 806c보다는 낮은 물질을 파쇄냉매로 사용한다. 그런 물질이 많이 있지만 가장 구하기 쉽고 가장 싸고 농축된 프로판(끓는점- 42.120c, 녹는점- 187.10c, 분자량 44.1)이고 냉각속도가 가장 빠르다. . 그러나 단점은 가연성이라는 것입니다.
생물 현미경은 근육 섬유를 특수 랙에 놓을 수 있으므로 근육 섬유 수축이 특정 단계에 도달하고 고정해야 할 때 즉시 노즐을 시작하여 액체 프로판을 근육 섬유에 분사하여 담금질하고 고정합니다. 그런 다음 프레임과 함께 근육 섬유를 꺼내어 액체 질소에 넣었습니다. 혈구 또는 분리된 세포를 고정하는 경우 먼저 저속으로 원심분리하여 세포를 농축하고 열전도율이 좋은 은 바이알에 세포를 옮기고 바이알을 액체 프로판에 넣고 동결하여 고정합니다. 홀 연구실에서 쥐 췌장을 고정할 때 두 개의 강철 블록을 액체 헬륨(또는 액체 질소)으로 미리 냉각하고 두 개의 구리 블록을 집게로 고정하고 췌장의 앞뒤에 배치하여 담금질하고 고정했습니다. 췌장. 조직 또는 세포는 담금질 및 고정 후 장기 보관을 위해 액체 질소에 보관할 수 있습니다.
생물학적 현미경 현재 가장 존경받는 냉동 초박 절편 방법에 더하여 과학자들이 사용하는 또 다른 증착 기술이 있습니다. 물질을 첨가하여 침전물을 형성하고 분석할 성분을 분석 전에 고정화한 다음 침전물을 분석합니다. 예를 들어, 사람들은 종종 옥살레이트와 파이로안티모네이트를 사용하여 근육 세포에 ca를 축적합니다. 전자는 세포질의 낮은 Ca 농도에 충분히 민감하지 않습니다. pyroantimonate는 더 민감하고 뇌에서 유리 Ca와 함께 전자 밀도가 높은 침착물을 형성할 수 있지만, pyroantimonate는 나트륨, 망간, 바륨, 철 침착물과도 호환되지 않으며 덜 특이적입니다. 검체 준비 과정은 일반 투과전자현미경 극박절편 검체 준비와 유사하나 차이점은 고정 전 6시간 동안 3% potassium pyroantimonate (phosphate buffer saline, pH 7.6)를 고정하고, 염색된 근육 극박절편에 각 sarcomere의 band A와 band 2의 중간선에 흑색 침전물이 보였고 얼룩이 없는 부분을 X-선 미세분석에 사용했습니다. DAB(Diaminobenzidine tetrahydrochloride)는 헴 함유 물질 등을 침전시키는 데 사용되었습니다. 조직화학적 침전 반응과 X선 미세분화 브리지의 조합은 동결된 극박 절편 조건이 없는 실험실에서 고려할 수 있습니다. 분석하고자 하는 원소의 피크 높이에 따라 반정량화 가능
