현미경을 이용한 미생물 직접계수
실험 원리
혈구계산기를 사용하여 현미경으로 직접 계수하는 방법은 일반적으로 사용되는 미생물 계수 방법입니다. 이 방법의 장점은 직관적이고 빠르다는 것입니다. 적절하게 희석된 세균 현탁액(또는 포자 현탁액)을 슬라이드와 혈구계의 커버 유리 사이의 계수 챔버에 놓고 현미경으로 계수합니다. 계수실의 부피는 고정되어 있으므로(0.1mm2) 현미경으로 관찰되는 미생물 수에 따라 단위 부피당 전체 미생물 수로 환산할 수 있습니다. 이 방법은 살아 있는 세균과 죽은 세균의 합을 계산하기 때문에 총균수법이라고도 합니다.
혈구계측기는 일반적으로 4개의 홈이 3개의 플랫폼을 형성하는 특수 유리 슬라이드입니다. 중앙의 플랫폼은 짧은 수평 홈에 의해 두 부분으로 나뉩니다. 플랫폼의 각 측면에는 그리드가 새겨져 있습니다. 각 그리드는 9개의 큰 사각형으로 나뉩니다. 중앙에 있는 큰 사각형은 계산실이다. 미생물은 계수실에서 계수됩니다. 혈구계수판의 구조는 그림 Ⅷ-1에 나타나 있다.
계산실의 규모는 일반적으로 두 가지 사양을 가지고 있는데, 하나는 큰 정사각형이 16개의 중간 정사각형으로 분할되고, 각 중간 정사각형이 25개의 작은 정사각형으로 분할된다는 것입니다(그림 Ⅷ-2). 다른 하나는 큰 광장입니다. 정사각형은 25개의 중간 정사각형으로 나누어지고, 각각의 중간 정사각형은 16개의 작은 정사각형으로 나누어진다(그림 Ⅷ-1, C). 그러나 어떤 종류의 계수판이든지 큰 정사각형 하나에 들어 있는 작은 정사각형의 개수는 그림 Ⅷ-2과 같이 16×25=400개의 작은 정사각형으로 동일하다.
각 큰 정사각형의 변 길이는 1mm이고, 각 큰 정사각형의 면적은 1mm2입니다. 커버 글라스를 덮은 후 슬라이드 글라스와 커버 글라스 사이의 높이는 0.1mm이므로 계수실의 부피는 0.1mm3입니다.
계산할 때 일반적으로 5개의 중간 격자에 있는 총 박테리아 수를 센 다음 각 중간 격자의 평균값을 얻은 다음 16 또는 25를 곱하여 큰 격자에 있는 총 박테리아 수를 구한 다음 1ml 박테리아 용액에 들어있는 총 박테리아 수.
실험실 장비
혈구계측기, 현미경, 커버슬립, 멸균 모세관;
실험재료
Saccharomyces cerevisiae 현탁액
실험과정(미생물현미경 직접계수법)
1. 희석
Saccharomyces cerevisiae 현탁액을 적절하게 희석하십시오. 박테리아 용액이 걸쭉하지 않으면 희석할 필요가 없습니다.
2. 현미경 계수실
샘플을 추가하기 전에 계수판의 계수 챔버를 현미경으로 검사하십시오. 먼지가 있으면 계산하기 전에 청소해야 합니다.
3. 샘플 추가
깨끗하고 건조한 혈구계 플레이트를 커버 글래스로 덮은 다음 멸균된 입이 가는 점적기를 사용하여 커버 글래스 가장자리에서 희석된 Saccharomyces cerevisiae 용액을 작은 방울(너무 많지 않게) 떨어뜨려 박테리아 용액이 틈새를 따라 틈새에 가깝습니다. 모세혈관 삼투는 저절로 계수실로 들어가고 일반 계수실에는 세균액이 채워질 수 있습니다. 기포가 생기지 않도록 주의하세요.
4. 현미경 수
5분 동안 휴식을 취한 후 혈구계를 현미경 스테이지에 놓고 먼저 저배율 렌즈를 사용하여 계수 챔버의 위치를 찾은 다음 고배율 렌즈로 전환하여 계수합니다. 계수하기 전에 세균 용액이 너무 진하거나 너무 묽은 것으로 확인되면 계수하기 전에 희석률을 다시 조정해야 합니다. 일반적으로 시료를 희석하려면 각 세포에 약 5-10개의 박테리아가 필요합니다. 각 계수 챔버는 계수를 위해 5개의 중간 그리드(선택적으로 4개의 모서리와 중앙 그리드)에서 박테리아를 선택합니다. 그리드 라인의 박테리아는 일반적으로 위쪽 및 오른쪽 라인에서만 계산됩니다. 효모 발아의 경우 새싹체의 크기가 모세포의 절반에 도달하면 2개의 박테리아를 센다. 샘플을 세어 두 개의 계수 챔버에서 계산된 값으로부터 샘플의 박테리아 함량을 계산합니다.
5. 혈세포계 청소
사용 후에는 수도꼭지에 달린 혈구계산판을 물줄기로 헹구고, 딱딱한 물건으로 씻지 말고, 세탁 후 직접 건조시키거나 헤어드라이어로 말려주세요. 현미경 검사를 통해 각 세포에 잔류 박테리아나 기타 침전물이 있는지 관찰합니다. 깨끗하지 않은 경우 깨끗해질 때까지 반복해서 세탁해야 합니다.
