형광 현미경 관련 지식
공초점 형광 현미경의 기본 원리: 점광원을 사용하여 시편을 조사하고 초점면에 잘 정의된 작은 광점을 형성합니다. 스플리터로 구성되어 있습니다. 빔 스플리터는 형광을 검출기로 직접 보냅니다. 광원과 검출기 앞에 각각 조명용 핀홀과 검출용 핀홀이라고 하는 핀홀이 있습니다. 둘의 기하학적 크기는 약 100-200nm로 동일합니다. 즉, 광점이 일련의 렌즈를 통과하고 최종적으로 조명 핀홀과 검출 핀홀에 동시에 초점을 맞출 수 있습니다. 이러한 방식으로, 초점면으로부터의 빛은 감지 구멍의 범위 내에서 수렴될 수 있는 반면, 초점면 위 또는 아래로부터 산란된 빛은 감지 구멍 외부에서 차단되어 이미지화될 수 없습니다. 레이저는 샘플을 한 점씩 스캔하고 핀홀을 감지한 후 광전자 증배관은 해당 광점의 공초점 이미지를 한 점씩 얻습니다. 이 이미지는 디지털 신호로 변환되어 컴퓨터로 전송되고 최종적으로 명확한 전체 초점면의 공초점 이미지를 화면에 표시합니다.
각 초점면 이미지는 실제로 시편의 광학적 단면이며, 이 광학적 단면은 항상 광학적 얇은 단면이라고도 하는 특정 두께를 가집니다. 초점에서 빛의 세기가 비초점에서보다 훨씬 크고 무초점 평면 빛이 핀홀에 의해 걸러지기 때문에 공초점 시스템의 피사계 심도는 대략 0이 되고 Z축을 따라 주사합니다. -축은 샘플의 초점을 맞춘 지점에서 2차원 광학 섹션을 관찰하여 광학 단층 촬영을 실현할 수 있습니다. XY 평면(초점면) 스캐닝과 Z축(광축) 스캐닝을 결합하여 연속 레이어의 2차원 이미지를 축적하고 특수 컴퓨터 소프트웨어로 처리하여 샘플의 3차원 이미지를 얻을 수 있습니다.
즉, 검출 핀홀과 광원 핀홀은 항상 같은 지점에 초점이 맞춰져 있어 초점면 외부에서 여기된 형광이 검출 핀홀로 들어갈 수 없다.
레이저 공초점의 작동 원리를 간단하게 표현하면 레이저 광을 광원으로 사용한다는 것입니다. 기존의 형광현미경 이미징을 기반으로 레이저 스캐닝 장치와 복합 포커싱 장치를 추가하여 컴퓨터 제어를 통해 디지털 이미지 획득 및 처리가 가능한 시스템입니다.
