형광 현미경은 광 경로 원리에 따라 두 가지 유형으로 나눌 수 있습니다.
1. 투과 형광 현미경
오래된 형광 현미경은 시편 재료를 통해 여기 광원을 전달하여 형광을 자극하기 위해 스포트라이트를 사용합니다. 이 장점은 낮은 배율에서 강한 형광이지만, 그 단점은 배율이 증가함에 따라 형광이 감소한다는 것입니다. 따라서 더 큰 시편 재료를 관찰하는 데만 적합합니다.
2. 가벼운 광 형광 현미경
여기광은 대물 렌즈에서 시편 표면으로 내려와 조명 응축기와 동일한 대물 렌즈 및 형광 수집을위한 대물 렌즈를 사용합니다.
듀얼 컬러 빔 스플리터 (dichroic mirror)는 광 경로에 추가되어야하며, 이는 광학 축으로 45도 각도를 형성합니다. 여기광은 대물 렌즈에 반사되고 샘플에 중점을 둡니다. 샘플에 의해 생성 된 형광 및 대물 렌즈 및 덮개 유리의 표면에서 반사 된 여기광은 동시에 대물 렌즈에 들어가서 이중 색상 빔 스플리터로 돌아와 여기광과 형광을 분리합니다. 이어서, 잔류 여기 광은 필터 흡수에 의해 차단된다. 여기 필터, 이중 색상 빔 분리기 및 차단 필터의 다른 조합이 사용되면 다른 형광 반응 생성물의 요구를 충족시킬 수 있습니다.
이 형광 현미경의 장점은 균일 한 필드 조명, 명확한 이미징 및 더 큰 배율로 더 강한 형광입니다.
3. 위상 대비 현미경
위상 대비 현미경은 빛을 통과 할 때 생성 된 위상차 (또는 광 경로 차이)를 변환 할 수있는 현미경입니다. 주로 살아있는 세포, 비 염색 된 조직 섹션 또는 대비가없는 염색 된 시편을 관찰하는 데 주로 사용됩니다.
인간의 눈은 파장 (색)의 변화와 가시 광선의 진폭 만 구별 할 수 있지만 위상의 변화를 구별 할 수는 없습니다. 대부분의 생물학적 표본은 투명성이 매우 높으며, 광파의 진폭은 기본적으로 통과 한 후에 만 변경되지 않고 위상 변화 만 남습니다.
위상 대비 현미경은 기본적으로 시편을 통과하는 가시 광선의 광학 경로 차이를 진폭 차이로 변환시켜 다양한 구조 사이의 대비를 개선하고 명확하고 가시적입니다. 시편을 통과 한 후, 빛은 원래 광 경로에서 벗어나 1/4 λ (파장)만큼 지연되는 굴절을 겪습니다. 광학 경로 차이가 다른 1/4 λ에 의해 증가하거나 감소하면, 광 경로 차이는 1/2 λ가되고, 두 광선 사이의 간섭이 축소 된 후에 증가하거나 감소하여 대비가 향상됩니다.
