형광현미경 검출방법
형광현미경
형광 현미경 검사법은 면역형광 세포화학을 위한 기본적인 도구입니다. 광원, 필터 플레이트 시스템, 광학 시스템 등의 주요 구성 요소로 구성됩니다. 특정 파장의 빛을 사용하여 표본을 여기시키고 형광을 방출하며, 이는 대물렌즈와 접안렌즈 시스템을 통해 확대되어 표본의 형광 이미지를 관찰합니다(그림 1).
(1) 광원
요즘에는 200W 초고압 수은 램프가 광원으로 일반적으로 사용됩니다. 석영 유리로 만들어졌으며 중앙이 구형이고 내부에 일정량의 수은이 채워져 있습니다. 작동 중에 두 전극 사이의 방전으로 인해 수은이 증발하고 구 내부의 압력이 급격히 증가합니다. 수은이 완전히 증발하면 50-70 표준 대기압에 도달할 수 있으며, 일반적으로 약 5-15분이 소요됩니다. 초고압 수은 램프의 발광은 전극 사이의 방전으로 인해 발생하며, 이는 수은 분자를 지속적으로 해리 및 감소시키고 광자를 방출합니다. 다양한 형광물질을 여기시키기에 충분한 강한 자외선과 청자색광을 방출하므로 형광현미경에 널리 사용된다.
형광현미경 사용 시 주의사항
(1) 형광현미경 공장의 지시사항을 엄격히 준수하고 프로그램을 임의로 변경하지 마십시오.
(2) 검사는 암실에서 실시한다. 암실에 입장한 후 전원을 연결하고 초고압 수은등을 5-15분 동안 켜줍니다. 광원이 강한 빛을 방출하고 안정화된 후, 눈이 암실에 완전히 적응한 후 표본 관찰을 시작합니다.
(3) 자외선에 의한 눈의 손상을 방지하기 위해 광원 조정 시에는 보호안경을 착용해야 합니다.
(4) 검사 시간은 1회당 1-2시간이어야 합니다. 90분을 초과하면 초고압 수은등의 광도가 점차 감소하고 형광도 약해진다. 3-5일 동안 자외선에 노출된 표본
분 후에 형광도 크게 감소했습니다. 따라서 최대 기간은 2-3시간을 초과할 수 없습니다.
(5) 형광현미경 광원의 수명은 제한되어 있으므로 검체를 중앙에서 검사하여 시간을 절약해야 합니다.
시간을 절약하고 광원을 보호하십시오. 날씨가 더울 때는 선풍기를 추가해 열을 발산하고 식혀야 합니다. 새 전구를 교체할 때에는 처음부터 사용시간을 기록해야 합니다. 불이 꺼졌다가 다시 사용하고 싶을 때에는 전구가 충분히 식은 후에 불을 켜야 합니다. 하루에 여러 번 광원을 조명하지 마십시오.
(6) 형광은 시간이 지남에 따라 점차 약해지기 때문에 염색 직후 검체를 관찰하십시오. 검체를 폴리에틸렌 비닐봉지에 4도 보관하면 형광 감쇠 시간을 지연시키고 장착제의 증발을 방지할 수 있습니다.
(7) 형광 밝기에 대한 판단 기준은 일반적으로 4가지 수준, 즉 "1"(형광이 없거나 눈에 보이는 약한 형광)으로 나뉩니다. "+" - 눈에 보이는 형광만 보입니다. ++- 밝은 형광으로 보입니다. "+++" - 가시적이고 눈부신 형광.
