자신에게 맞는 공초점 현미경을 어떻게 선택할 수 있습니까? 구체적인 방법이 있나요?
공초점 현미경은 광시야 현미경보다 더 많은 장점이 있습니다. 공초점 현미경은 샘플의 연속적인 광학 단면화를 수행하고 비초점면의 신호 간섭을 배제할 수 있습니다. 이러한 이유로 공초점 현미경의 적용이 실제로 더 일반적입니다. 그러나 시장에는 점점 더 많은 공초점 현미경이 있습니다. 선택하는 방법?
공초점 현미경은 광시야 현미경보다 더 많은 장점이 있습니다. 공초점 현미경은 샘플의 연속적인 광학 섹션을 만들고 비초점 평면의 신호 간섭을 배제할 수 있습니다. 이러한 이유로 공초점 현미경이 실제로 더 일반적입니다. 그러나 시장에는 점점 더 많은 공초점 현미경이 있습니다. 선택하는 방법? 공초점 현미경을 선택할 때 두 가지 기본적이고 중요한 고려 사항이 있습니다: 연구하려는 샘플 유형(예: 고정 또는 살아있는 세포) 및 수행하려는 분석 유형(예: 정적 또는 동적 세포 프로세스).
고정 세포의 공초점 이미징
고정 및 염색된 세포 또는 조직을 이미지화하기 위해 일반적으로 레이저 스캐닝 공초점(LSCM)을 선택합니다. 이것은 주로 고정된 죽은 세포가 살아있는 세포에서 빠른 생물학적 사건이 부족하고 LSCM의 더 높은 공간 분해능으로부터 더 나은 이점을 얻을 수 있기 때문입니다. LSCM 이미징은 샘플을 레이저로 광학적으로 슬라이스하는 것으로 스캐닝 속도(스캐닝 어레이 미러의 속도에 따라 다름)는 일반적으로 1fps입니다. 노출 시간이 길수록 광표백의 위험이 더 커진다는 것을 의미하지만 고정된 죽은 세포 시간은 중요하지 않으며 여러 장의 사진을 찍어 평균화할 수 있습니다.
살아있는 세포의 공초점 이미징
살아있는 세포를 이미징하려면 비우호적인 환경으로부터 추가적인 보호가 필요합니다. 이미징 시 가장 먼저 고려해야 할 사항은 세포 생존력과 건강을 유지하는 것입니다. 항온 가열 요소와 관류 시스템은 특히 시간 경과 연구에 필수적입니다. 살아있는 세포의 생리학적 상태를 제어하는 빠른 생화학적 사건은 대부분의 사람들이 연구하기를 원하는 것이지만 이러한 사건은 기존의 LSCM으로는 너무 빠릅니다. 또한 LSCM에 장기간 노출되면 세포에 독성 빛 손상이 유발됩니다. 따라서 살아있는 세포를 영상화하려면 특별한 공초점 현미경이 필요합니다.
일반적으로 살아있는 세포의 공초점 이미징에는 고속 스캐닝 레이저 스캐닝 공초점과 회전 디스크 공초점의 두 가지 옵션이 있습니다. 빠른 스캐닝 공초점 현미경은 느린 검류계 미러를 더 빠른 공진 스캐닝 미러로 대체하여 최대 30fps의 스캐닝 속도를 가능하게 합니다. SDCM(spinning disk confocals)은 스캐닝 속도가 더 빠르다는 장점이 있지만(비록 공간 해상도 손실이 불가피하지만) 이론적으로 속도는 2000fps에 도달할 수 있습니다(실제로는 종종 다른 요인에 의해 제한됨).
광표백 또는 매우 약한 형광 신호가 우려되는 경우 SDCM이 더 적합할 수 있습니다. SDCM은 마이크로웰이 배열된 두 개의 회전 디스크를 사용하여 여기광을 분산시킵니다. 샘플 스팟을 스캔하는 LSCM과 달리 SDCM은 한 번에 여러 스팟(약 100픽셀 스팟)을 획득하므로 속도가 크게 증가하고 SDCM의 광퇴색 및 광독성이 적습니다. 그러나 빠른 스캐닝 공초점을 사용하여 고감도 검출기와 결합하여 스캐닝 속도를 높이고 여기 광 에너지를 줄여 광독성을 줄여 기존 공초점의 풍부한 기능을 유지할 수 있습니다.
자동 공초점 이미징 시스템
일부 연구자들은 개인의 필요에 맞게 현미경을 수정하는 방법을 찾는 것을 좋아합니다. 그리고 일부 연구자들은 현미경이 실제로 어떻게 작동하는지에 관심조차 없습니다. 후자의 경우 자동화된 공초점 현미경이 더 적합할 수 있습니다. 예를 들어 Olympus FluoViewFV10i는 전자동 데스크톱 4-레이저 공초점 현미경입니다. 컴팩트한 일체형 구조로 설치 공간이 거의 필요하지 않습니다. 이 유형의 기기는 매일 많은 이미지 데이터 수집을 수행해야 하는 연구원에게 이상적이지만 물론 기존 공초점의 기능과 유연성을 완전히 반영하지는 않습니다. 또한 NikonA1은 전자동 공초점 시스템이기도 합니다. 대부분의 기존 공초점 스캐닝 현미경과 마찬가지로 NikonA1은 검류계 스캔 헤드를 사용합니다. 이 스캔 헤드는 하이브리드 스캔 헤드가 있는 A1R보다 해상도가 높지만 속도는 약간 느립니다(A1R ~30fps).
