형광 현미경 검사법과 공초점 레이저 현미경 검사법의 차이점
형광현미경
1. 형광현미경은 자외선을 광원으로 하여 검사 대상물에 빛을 비추어 형광을 발생시킨 후 현미경으로 대상물의 모양과 위치를 관찰하는 것입니다. 형광현미경은 세포 내 물질의 흡수와 이동, 화학 물질의 분포와 위치를 연구하는 데 사용됩니다. 엽록소와 같은 세포 내 일부 물질은 자외선을 조사한 후 형광을 발할 수 있습니다. 물질 자체로는 형광을 발하지 못하는 물질도 있지만, 형광염료나 형광항체로 염색하면 자외선을 조사하면 형광을 발할 수 있다. 형광현미경은 그러한 물질에 대한 정성적, 정량적 연구를 위한 도구 중 하나입니다.
2. 형광현미경의 원리:
(A) 광원: 광원은 다양한 파장(자외선부터 적외선까지)의 빛을 방출합니다.
(B) 여기 필터 광원: 시료에 형광을 발산시킬 수 있는 특정 파장의 빛을 전달하는 동시에 형광을 자극하는 데 쓸모가 없는 빛은 차단합니다.
(다) 형광표본 : 일반적으로 형광색소로 염색된다.
(D) 차단 필터: 시료에 흡수되지 않는 여기광을 차단하고 선택적으로 형광을 투과시킵니다. 형광의 일부 파장도 선택적으로 전달됩니다. 자외선을 광원으로 사용하여 조명된 물체에 형광을 발하게 하는 현미경입니다. 전자현미경은 1931년 독일 베를린에서 Knorr와 Hallowska에 의해 처음 조립되었습니다. 이 현미경은 광선 대신 고속 전자빔을 사용합니다. 전자 흐름의 파장은 빛의 파장보다 훨씬 짧기 때문에 전자현미경의 배율은 800,000배에 도달할 수 있으며 최소 분해능 한계는 0.2나노미터입니다. 1963년부터 사용되기 시작한 주사전자현미경은 물체 표면의 미세한 구조를 볼 수 있게 해준다.
3. 적용 범위: 작은 물체의 이미지를 확대하는 데 사용됩니다. 일반적으로 생물학, 의학, 미세한 입자 등의 관찰에 사용됩니다.
공초점 현미경
1. 공초점현미경은 반사광의 광로에 반반사형 세미렌즈를 추가하여 렌즈를 통과한 반사광을 다른 방향으로 굴절시키는 장치입니다. 초점에 핀홀이 있는 배플이 있고, 핀홀은 배플 뒤에 있는 초점에 광전자 증배관이 있습니다. 검출광 초점 전후의 반사광은 이 공초점 시스템을 통과하여 작은 구멍에 초점을 맞추지 못하고 배플에 의해 차단될 것이라고 상상할 수 있습니다. 따라서 광도계가 측정하는 것은 초점에서 반사된 빛의 강도입니다.
2. 원리: 전통적인 광학 현미경은 현장 광원을 사용하며 표본의 각 지점의 이미지는 인접한 지점의 회절 또는 산란광에 의해 간섭됩니다. 레이저 스캐닝 공초점 현미경은 레이저 빔을 사용하여 핀홀을 조명하여 점 광원을 형성하여 표본 내부를 조명합니다. 초점면의 각 지점을 스캔하고 시료의 조명된 지점이 탐지 핀홀에 이미지화되며, 탐지 뒤의 광전자 증배관(PMT) 또는 냉간 결합 장치(cCCD)에 의해 지점별로 또는 라인별로 수신됩니다. 핀홀이 생기고 빠르게 컴퓨터 모니터 화면에 형광 이미지가 형성됩니다. 조명 핀홀과 검출 핀홀은 대물 렌즈 초점면에 대해 공액입니다. 초점면의 점은 조명 핀홀과 방출 핀홀에 동시에 초점이 맞춰집니다. 초점면 외부의 점은 감지 핀홀에서 이미지화되지 않습니다. 이를 통해 얻은 공초점 이미지는 표본의 광학적 단면으로 일반 현미경의 흐릿한 이미지 단점을 극복한 것입니다.
3. 응용 분야: 의학, 동식물 과학 연구, 생화학, 세균학, 세포 생물학, 조직 발생학, 식품 과학, 유전학, 약리학, 생리학, 광학, 병리학, 식물학, 신경 과학, 해양 생물학 및 재료 과학, 전자 과학 , 역학, 석유 지질학, 광물학.
