현미경으로 미생물 세포의 형태를 어떻게 관찰하나요?

현미경으로 미생물 세포의 형태를 어떻게 관찰하나요?

현미경은 육안으로는 볼 수 없는 웃는 물체를 보기 위해 발명되었습니다. 미생물은 매우 작기 때문에 현미경을 사용하여 확대하여 관찰해야 합니다. 또한, 미생물의 종류도 다양하므로 기본적으로 대부분의 광학현미경으로 미생물을 관찰할 수 있다. 다음 질문은 어떤 미생물을 관찰하고 분석하려면 어떤 현미경을 사용해야 하는가이다. 미생물의 형태를 관찰하는데 사용할 수 있는 일반적인 현미경으로는 생물현미경, 위상차현미경, 도립현미경, 형광현미경, 공초점현미경 등이 있다.

다음은 미생물을 관찰하는 데 사용되는 다양한 현미경에 대한 설명입니다.

1. 일반 광학현미경은 자연광이나 빛을 광원으로 사용하며 파장은 약 0.4 μm입니다. 현미경의 분해능은 파장의 1/2, 즉 0.2μm이며, 육안으로 볼 수 있는 가장 작은 상은 0.2mm이다. 따라서 유(침지)거울을 사용하여 1000배 확대하면 0.2μm 입자를 육안으로 볼 수 있는 0.2mm 크기로 확대할 수 있습니다. 박테리아, 방선균, 진균의 관찰에는 일반 광학현미경을 사용할 수 있습니다.

2. 암시야 현미경은 염색되지 않은 미생물의 형태와 움직임을 관찰하는 데 일반적으로 사용됩니다. 일반 현미경에 암시야 집광기를 설치한 후에는 빛이 중앙에서 직접 침투할 수 없어 시야가 어두워집니다. 시료가 집광기 가장자리에서 비스듬한 빛을 받으면 산란될 수 있으므로 암시야 배경에서 박테리아나 스피로헤타와 같은 밝은 미생물을 관찰할 수 있습니다.

3. 위상차 현미경 위상차 현미경은 위상차 판의 조명 효과를 사용하여 직접광의 광 위상과 진폭을 변경하고 광 위상의 차이를 광 강도 차이로 변환합니다. 위상차현미경에서는 염색되지 않은 표본에 빛이 통과할 때 표본의 각 부분의 밀도 불일치로 인해 빛상의 차이가 발생하며 미생물의 형태, 내부 구조 및 이동 방식을 관찰할 수 있습니다.

4. 형광 현미경 형광 현미경은 기본적으로 일반 광학 현미경과 동일하며 주요 차이점은 광원, 필터 및 콘덴서입니다. 현재 대부분 에피라이트 장치를 사용하고 있으며, 자외선이나 청자색 빛을 방출할 수 있는 고압 수은 램프가 광원으로 흔히 사용된다. 필터에는 여기 필터와 흡수 필터의 두 가지 종류가 있습니다. 일반적인 명시야 콘덴서 외에도 암시야 콘덴서는 청색광을 사용하는 형광현미경에도 사용되어 형광과 배경의 대비를 향상시킬 수 있습니다. 이 방법은 형광 색소로 염색되거나 형광 항체와 결합된 박테리아의 검출 또는 식별에 적용 가능합니다.

5. 전자현미경은 전자의 흐름을 광원으로 사용하며, 파장은 가시광선과 수만배 차이가 나므로 분해능이 크게 향상됩니다. 또한 자기 코일을 광학 증폭 시스템으로 사용하며 배율은 수만 배 또는 수십만 배에 달할 수 있습니다. 바이러스 입자와 세균의 미세구조를 관찰하는 데 자주 사용됩니다.

염색되지 않은 미생물 표본의 관찰:
염색되지 않은 표본은 일반적으로 박테리아의 형태, 힘 및 움직임을 관찰하는 데 사용할 수 있습니다. 세균은 염색되지 않은 상태에서는 무색 투명하며, 주로 세균의 굴절률과 주변 환경의 차이에 의해 현미경으로 관찰됩니다. 편모가 있는 박테리아는 활발하게 움직이는 반면, 편모가 없는 박테리아는 불규칙한 브라운 운동을 보입니다. Treponema pallidum, Leptospira 및 Campylobacter와 같은 생존 가능한 박테리아는 진단에 중요한 독특한 모양과 운동 패턴을 가지고 있습니다. 일반적으로 사용되는 방법에는 압력 강하법, 펜던트 낙하법 및 모세관법이 있습니다.

1. 깨끗한 오목유리의 오목한 구멍 주위에 매달기 방식으로 바셀린을 바르고, 접종 루프를 사용하여 세균 현탁액 고리를 취하여 커버 유리의 중앙에 놓은 다음, 오목유리의 오목한 구멍을 커버글라스 중앙의 한 방울씩 떨어뜨려 덮은 후 재빠르게 뒤집어 커버글라스를 가볍게 눌러 오목한 구멍 가장자리의 바셀린에 단단히 붙도록 한 후 고배율 현미경(또는 암시야).

2. 접종 루프가 있는 세균 현탁액 링을 취하여 압력 강하 방식으로 깨끗한 유리 슬라이드 중앙에 놓고 세균 현탁액이 기포가 넘치거나 넘치지 않도록 주의하면서 커버 유리로 세균 현탁액을 부드럽게 덮습니다. . 몇 초간 가만히 서 있다가 고배율 현미경으로 명시야(또는 암시야)에서 관찰합니다.

3. 혐기성 세균의 동역학을 조사하는 데에는 모세관법이 주로 사용됩니다. 일반적으로 길이는 60~70mm를 선택합니다. 혐기성 세균 현탁액을 구경 0.5-1.0mm의 모세관을 통해 흡입한 후 모세관의 양쪽 끝을 불꽃으로 밀봉합니다. 모세관을 플라스틱 종이로 슬라이드 유리 위에 고정한 후 고배율 렌즈를 사용하여 암시야에서 관찰했습니다.

현미경을 이용한 염색된 미생물 표본 관찰:
박테리아 표본이 염색된 후 박테리아와 주변 환경 사이의 색상의 선명한 대비로 인해 박테리아의 형태학적 특성(예: 크기, 모양, 배열 등) 및 일부 특수 구조(예: 캡슐, 편모, 포자 등)을 일반 광학현미경으로 명확하게 관찰할 수 있으며, 염색반응성에 따라 세균을 분류, 동정할 수 있습니다.

(1) 세균 염색의 일반적인 과정 세균 염색의 일반적인 과정은 도말(건조) - 고정 - 염색이다.

1. 도말 혈액, 분비물, 배설물, 천자액 및 액체배양물을 준비하고 슬라이드 유리에 직접 얇은 막으로 도말한다. 부검 또는 감염된 동물 조직의 경우, 샘플링을 위해 면봉으로 병변을 도말하십시오. 고체 배지에 박테리아 콜로니 또는 잔디밭을 준비하려면 먼저 접종 루프를 사용하여 일반 식염수 링을 취하여 유리 슬라이드 중앙에 놓은 다음 멸균 접종 루프를 사용하여 소량의 배양 물을 채취하고 분쇄합니다. 생리식염수에 고르게 묻혀서 1cm2 코팅면에 펴서 상온에서 자연건조시키거나 거리를 두고 천천히 건조시켜주세요.

2. 고정의 목적은 박테리아를 죽이고 박테리아의 단백질과 구조를 응고시키며 염색을 촉진하는 것입니다. 세척 중에 물에 씻겨 나가는 것을 방지하기 위해 박테리아가 슬라이드에 부착되도록 촉진합니다. 박테리아의 투과성을 염료로 변경하여 박테리아 세포 내 구조의 염색에 유리합니다. 보통 불꽃으로 가열하여 고정시키며, 건조된 도말을 불꽃을 3회에 걸쳐 빠르게 통과시킵니다. 슬라이드에 닿았을 때 손등의 피부를 태우지 않는 것이 좋습니다.

3. 염색 다양한 검사 목적에 따라 다양한 염색 방법을 선택하여 염색하십시오. 염색시 염색액을 한방울씩 첨가해 커버력을 높여주세요.

4. 매염제 염료와 염색물 사이의 친화력을 높여주고, 염색물에 염료를 고정시키며, 세포막의 투과성을 변화시키는 물질을 매염제라고 합니다. 명반, 탄닌산, 금속염, 요오드 등이 흔히 사용되며, 착색을 촉진시키기 위해 가열하는 방법도 사용된다. 매염제는 1차염색과 대비염색 사이에 사용할 수 있으며, 고정 후 사용하거나 고정액과 염색에 함유하여 사용할 수도 있습니다.

5. 탈색 염색된 물체의 색상을 제거할 수 있는 모든 화학약품을 탈색제라고 합니다. 탈색제로는 흔히 에탄올, 아세톤 등이 사용됩니다. 탈색제는 박테리아와 염료의 결합에 대한 안정성 정도를 검출할 수 있으며, 이를 감별염색에 사용할 수 있습니다.

6. 대조염색 탈색된 박테리아 또는 그 구조는 쉽게 관찰할 수 있도록 대조염색 용액으로 대조염색하는 경우가 많습니다. 대비염색액의 색상은 1차염색액의 색상과 달라 선명한 대비를 이룬다. 대조염색은 초기 염색의 색상을 가리지 않도록 너무 강하지 않아야 합니다.