적절한 형광 현미경을 선택하는 방법
형광현미경은 관찰 및 영상화를 위해 형광 특성을 이용하는 실험실 및 병리과의 표준 현미경 영상 장비입니다. 세포생물학, 신경생물학, 식물학, 미생물학, 병리학, 유전학 등 다양한 분야에서 널리 사용됩니다. 형광 이미징은 감도와 특이성이 높다는 장점이 있어 특정 단백질, 세포 소기관 등의 분포를 관찰하는 데 매우 적합합니다. 조직과 세포에서 공동 위치화 및 상호 작용을 연구하고, 이온 농도 변화와 같은 생명 역학 과정을 추적합니다.
현미경 선택
형광현미경은 크게 세 가지로 분류되는데, 정립형광현미경(슬라이싱에 적합), 도립형광현미경(살아있는 세포와 슬라이싱에도 적합), 입체형광현미경(식물, 제브라피시(성인/ 배아), 송사리, 마우스/쥐 기관 등).
형광 필터 블록 선택
필터 블록을 선택할 때는 형광 프로브의 여기 및 방출 파장을 고려해야 할 뿐만 아니라 비특이적 여기가 있는지 여부와 다색 표지 샘플에 대한 색상 혼선이 있는지 여부도 고려해야 합니다. 실험에서는 여기를 위해 가능한 한 여기 피크에 가장 가까운 파장을 선택하고 수신 범위에는 피크 방출이 포함되어야 합니다. Alexa Fluor 488의 여기 피크는 500nm이며 형광 현미경에서 480/40 여기 필터를 선택할 수 있습니다. 형광 현미경 검사에서 일반적으로 사용되는 형광 필터 블록은 긴 통과(LP)와 밴드 통과(BP)의 두 가지 유형으로 나눌 수 있으며 필요에 따라 선택해야 합니다.
공초점 현미경
전통적인 형광 현미경 관찰에서는 형광 표지 물질과 자연 형광 구조의 중첩으로 인해 서로 단단히 결합되어 있습니다. 그러나 기존 낙하형광현미경 대물렌즈는 초점면에서 빛을 수집할 뿐만 아니라 초점면 위아래로 빛을 산란시켜 이미지 해상도와 대비가 크게 감소합니다.
공초점 이미징은 자체 초점 평면에서 반사된 빛만 감지하여 위의 문제를 해결합니다. 광원은 핀홀을 통해 초점면에 작고 미세한 점을 형성하고, 초점면에서 방출된 빛은 대물렌즈를 통해 집광됩니다. 대물렌즈의 초점면 위 또는 아래 지점에서 방출되는 형광의 대부분은 핀홀에 수렴할 수 없습니다. 초점면에 위치한 형광과 초점이 흐려진 형광의 작은 부분만이 핀홀을 통과할 수 있는 반면, 초점면 외부의 광선은 핀홀 플레이트 앞이나 뒤에 모이고 핀홀을 통해 검출기로 들어가는 것이 차단됩니다. 감지된 이미지는 초점면에서 나온 것이므로 최종 이미지 품질이 크게 향상됩니다.
레이저 스캐닝 공초점 현미경의 다양한 장점과 실용성으로 인해 현재 고정밀 세포생물학, 식물학, 세포 연구 분야에서 없어서는 안 될 실험 보조 장치입니다. 동시에 미래의 과학연구센터에서는 가장 기본적이고 핵심적인 연구도구가 될 것입니다.
