올바른 형광 현미경을 선택하는 방법
형광 현미경은 실험실 및 병리과를 위한 표준 현미경 이미징 장비입니다. 관찰 및 이미징을 위해 형광 특성을 사용합니다. 그것은 세포 생물학, 신경 생물학, 식물학, 미생물학, 병리학, 유전학 및 기타 분야에서 널리 사용됩니다. 형광 이미징은 고감도, 고특이성이라는 장점을 가지고 있으며, 조직 및 세포 내 특정 단백질 및 소기관의 분포 관찰, colocalization 및 상호작용 연구, 이온 농도 변화와 같은 생명 역학 과정 추적에 매우 적합합니다. , 등.
현미경의 선택
형광 현미경은 주로 세 가지 범주로 나뉩니다: 직립 형광 현미경(절단에 적합), 도립 형광 현미경(절편을 고려하여 살아있는 세포에 적합), 입체 형광 현미경(식물, 제브라피시(성인/성인/ 배아), 메다카, 쥐/쥐 장기 등).
형광 필터 큐브 선택
형광 프로브의 여기 및 방출 파장을 고려하는 것 외에도 필터 블록의 선택은 다색 표지 샘플에 대한 비특이적 여기 및 교차 색상이 있는지 여부도 고려해야 합니다. 실험에서 여기를 위한 여기 피크에 가장 가까운 파장을 선택하려고 할 것이며, 수신 범위는 방출 피크를 포함해야 합니다. 예를 들어, Alexa Fluor 488의 여기 피크는 500nm이며 형광 현미경에서 480/40 여기 필터를 선택할 수 있습니다. 형광 현미경에 일반적으로 사용되는 형광 필터 큐브는 긴 패스(줄여서 LP)와 밴드 패스(줄여서 BP)의 두 가지 유형으로 나눌 수 있으며 필요에 따라 선택해야 합니다.
형광 광원 선택
현재 일반적으로 사용되는 형광 광원으로는 수은 램프, 메탈 할라이드 램프, 최근 급속히 발전하고 있는 LED 광원이 있다. 형광 광원의 스펙트럼은 연속적이고 불연속적이며 에너지는 다른 밴드에서 다를 것입니다. 비교적 좁은 스펙트럼 대역, 보다 안정적인 에너지 출력, 긴 수명, 안전 및 환경 보호 및 기타 많은 이점으로 인해 LED 광원은 점차 형광 현미경의 주요 광원이 되고 있습니다.
공초점 현미경
기존의 형광현미경 관찰에서는 형광마커물질과 자가형광 구조가 중첩되어 밀접하게 결합되어 있는 반면, 기존의 형광현미경 대물렌즈는 초점면에서 빛을 모을 뿐만 아니라 초점 평면으로 인해 이미지 해상도와 대비가 크게 감소합니다.
공초점 이미징은 초점면에서 반사된 빛의 일부만 감지하여 이 문제를 해결합니다. 광원은 핀홀을 통과하여 초점면에 작고 미세한 광점을 형성합니다. 초점면에서 방출된 빛은 대물렌즈에 의해 수집됩니다. 대물렌즈의 초점면 위 또는 아래 지점에서 방출되는 대부분의 형광은 작은 구멍으로 수렴되지 않습니다. 초점면에 위치한 형광체와 오프포커스 형광체의 작은 부분만이 핀홀을 통과할 수 있는 반면, 초점면 외부의 광선은 핀홀판의 전면 또는 후면에서 수렴되어 핀홀. 감지된 이미지는 초점면의 이미지이므로 최종 이미지 품질이 크게 향상됩니다.
레이저 스캐닝 공초점 현미경 기능의 장점과 실용성으로 인해 공초점 현미경은 고정밀 세포 생물학, 식물학 및 세포 연구 분야에서 없어서는 안 될 실험 조수입니다. 동시에, 미래 과학 연구 센터에서는 가장 기본적이고 핵심적인 과학 연구 도구가 될 것입니다.
