공초점형광현미경에 대한 지식
공초점 형광 현미경의 기본 원리: 점 광원을 사용하여 표본을 조사하여 초점면에 작고 잘 정의된 빛의 점을 형성합니다. 조사 후 이 지점에서 방출된 형광은 대물 렌즈에 의해 수집되어 원래 조사 광 경로를 따라 양방향 색 거울로 구성된 빔 스플리터로 다시 전송됩니다. 빔 스플리터는 형광을 검출기로 직접 보냅니다. 광원과 검출기 모두 그 앞에 각각 조명 핀홀과 검출 핀홀이라고 불리는 핀홀이 있습니다. 둘 다 약 100-200 nm의 동일한 기하학적 구조를 갖고 있으며 초점면의 빛 점과 관련하여 공액입니다. 즉, 빛의 점은 일련의 렌즈를 통과하여 궁극적으로 조명 두 렌즈 모두에 초점을 맞출 수 있습니다. 그리고 탐지기 핀홀. 이러한 방식으로 초점면의 빛은 프로브 조리개 내에서 수렴할 수 있는 반면, 초점면 위 또는 아래에서 산란된 빛은 프로브 조리개 외부에서 차단되어 이미지화할 수 없습니다. 레이저는 샘플을 한 점씩 스캔하고, 핀홀을 감지한 후 광전자 증배관도 해당 광의 공초점 이미지를 한 점씩 얻습니다. 이는 디지털 신호로 변환되어 컴퓨터로 전송되고 최종적으로 선명한 이미지로 수렴됩니다. 화면 전체 초점면의 공초점 이미지.
각 초점면 이미지는 실제로 표본의 광학 단면이며, 이 광학 단면은 항상 광학 시트라고도 알려진 특정 두께를 갖습니다. 초점에서의 빛의 세기는 비초점에서의 빛의 세기보다 훨씬 크고 비초점 평면의 빛은 핀홀에 의해 걸러지기 때문에 공초점 시스템의 피사계 심도는 0에 가까워지고 스캐닝 Z축 방향을 따라 광학 단층촬영을 통해 표본의 2차원 광학 슬라이스를 형성하여 초점에서 관찰할 수 있습니다. XY 평면(초점 평면) 스캐닝과 Z축(광축) 스캐닝을 결합하면 특수 컴퓨터 소프트웨어로 처리되는 2차원 이미지의 연속적인 레이어를 축적하여 시료의 3차원 이미지를 얻을 수 있습니다.
이는 검출 핀홀과 광원 핀홀이 항상 같은 지점에 초점이 맞춰져 초점면 외부에 여기된 형광이 검출 핀홀에 들어갈 수 없음을 의미합니다.
레이저 공초점의 작동 원리는 레이저를 광원으로 사용하고 전통적인 형광 현미경 이미징, 추가 레이저 스캐닝 장치 및 접합 포커싱 장치를 기반으로 컴퓨터 제어를 통해 디지털 이미지 획득 및 처리 시스템을 수행한다는 것을 간단히 표현합니다.
