미생물량 측정 - 현미경 직접계수법!
박테리아 개체군의 성장은 세포 수의 증가 또는 세포 물질의 증가를 특징으로 합니다. 세포 수를 측정하는 방법에는 직접 현미경 계수, 플레이트 계수, 분광 광도계를 사용한 터보 측정, 최대 확률 MPN 및 막 여과 등 여러 가지 방법이 있습니다. 세포물질을 측정하는 방법에는 세포건조중량 측정, 질소, RNA, DNA 등 세포의 특정 성분 함량 측정, 대사산물 측정 등이 있습니다. 요약하자면, 미생물 성장을 측정하는 방법에는 여러 가지가 있으며 각각 고유한 장점과 단점이 있으므로 작업의 특정 요구 사항에 따라 선택해야 합니다. 이 실험에서는 주로 생산 및 과학 연구 작업에서 일반적으로 사용되는 현미경 직접 계수 방법을 소개합니다.
목적 요구 사항
1. 혈구계산판을 사용하여 계산하는 원리를 명확히 한다.
2. 미생물 계수를 위해 혈구 계수판을 사용하는 방법을 숙지합니다.
2, 기본 원칙
현미경 직접 계수 방법은 소량의 시료 현탁액을 특정 면적과 부피를 가진 특수 유리 슬라이드(세균 계수기라고도 함) 위에 올려 현미경 아래에서 직접 계수하는 간단하고 빠르며 직관적인 방법입니다. 현재 국내외에서 일반적으로 사용되는 세균 계수 장치에는 혈구 계수 판, Peteroff Hauser 세균 계수 장치, Hawksley 세균 계수 장치가 포함되며 모두 효모, 박테리아, 곰팡이 포자 등의 현탁액을 계수하는 데 사용할 수 있습니다. 동일한 기본 원칙으로. 후자의 두 종류의 세균 계수기는 커버 유리로 덮은 후 총 부피가 {{0}}.02mm3이며, 커버 유리와 캐리어 슬라이드 사이의 거리는 0.02mm에 불과합니다. 따라서 오일 침지 대물렌즈를 사용하여 박테리아와 같은 작은 세포를 관찰하고 계산할 수 있습니다. 이러한 세균 계수기를 이용하는 것 외에도 일반적으로 우유의 세균학적 검사에 사용되는 도말 면적과 필드 면적의 비율을 현미경으로 직접 관찰하는 추정 방법도 있습니다. 현미경을 이용한 직접 계수의 장점은 직관적이고 빠르며 조작이 쉽다는 것입니다. 그러나 이 방법의 단점은 측정된 결과가 일반적으로 죽은 세포와 살아있는 세포의 합이라는 것입니다. 현재 이러한 단점을 극복할 수 있는 방법으로는 생세포 염색 챔버 배양(짧은 시간)을 결합하고 세포 분열 억제제를 첨가하여 생세포만 계산하는 목표를 달성하는 등이 있습니다.
현미경으로 직접 계산하는 예로 혈구 계수판을 사용합니다. 나머지 2개의 세균계수기의 사용방법은 다양한 제조사의 매뉴얼에서 찾아보실 수 있습니다. 혈구 계수판을 사용하여 현미경으로 직접 계수하는 것은 미생물 계수에 일반적으로 사용되는 방법입니다. 계수판은 3개의 플랫폼을 형성하는 4개의 홈이 있는 특수 제작된 유리 슬라이드입니다. 중앙의 더 넓은 플랫폼은 짧은 수평 홈에 의해 두 부분으로 나뉘며 플랫폼의 양쪽에는 격자가 있습니다. 각 그리드는 9개의 큰 그리드로 나누어져 있으며 중앙의 큰 그리드는 계수실입니다. 혈구 계수판의 구조는 그림 1{{0}}에 나와 있습니다. 계산실의 규모에는 일반적으로 두 가지 사양이 있습니다. 하나는 큰 정사각형이 25개의 중간 정사각형으로 분할되고, 각 정사각형이 다시 16개의 작은 정사각형으로 분할된다는 것입니다(그림15-2). 또 다른 방법은 큰 정사각형을 16개의 중간 정사각형으로 나누고, 각 정사각형을 다시 25개의 작은 정사각형으로 나누는 것입니다. 그러나 계산판의 크기에 관계없이 각 큰 정사각형에는 4{11}}0개의 작은 정사각형이 있습니다. 각 정사각형의 한 변의 길이가 1mm라면 각 큰 정사각형의 면적은 1mm2입니다. 커버유리로 덮은 후 커버유리와 슬라이드 사이의 높이가 0.1mm이므로 계수실의 부피는 0.1mm3(1/1000밀리리터)이 됩니다. 그림 15-1 혈구 계수판 구조(I) 그림 15-2 혈구 계수판 구조(II) A 정면도; B. 수직단면도; 확대된 격자는 중앙에 계수실로 큰 사각형이 있습니다. 1. 혈구 계수판; 2. 커버 유리; 계수실에서 계수할 때에는 일반적으로 총균수를 5개의 정사각형으로 계산하고 각 정사각형의 평균값을 구한 후 25 또는 16을 곱하여 큰 정사각형의 총균수를 구하고 이를 다음과 같이 환산한다. 1ml 박테리아 용액의 총 박테리아 수. 5개의 정사각형 격자의 총 세균 수를 A이고 세균 용액의 희석 인자를 B라고 가정합니다. 정사각형 격자에 25개의 계수 플레이트가 있는 경우 세균 용액 1mL의 총 세균 수는 A/5 × 25 × 104입니다. × B=50000A · B. 마찬가지로 정사각형 격자에 16개의 계수판이 있는 경우 박테리아 용액 1mL에 포함된 총 박테리아 수는 A/5 × 16 × 104 × B=32000A · 비
