현미경영상교실丨광시야형광현미경
라이브 셀 이미징 응용 분야에서 광시야형 형광 현미경은 현미경 스테이지에 배치된 특정 환경 챔버에서 성장한 부착 세포의 역학 관찰을 용이하게 합니다. 가장 기본적인 구성에서 EPI 형광 조명이 장착된 표준 거꾸로 된 조직 배양 현미경은 영역 배열 검출기 시스템(일반적으로 CCD 카메라), 적합한 형광 필터 및 유해한 여기 빛에 대한 세포의 과도한 노출을 제한하는 셔터 시스템과 결합됩니다. . 기본 형광 현미경 검사는 방출된 빛의 조명 및 감지를 위한 특정 대역폭을 선택하기 위해 신중하게 일치된 간섭 필터에 의존합니다. 광원에는 수은, 크세논 및 메탈 할라이드 아크 램프, 빔 확장 레이저 시스템 및 발광 다이오드(LED)가 포함되며 모두 다른 필터 사양이 필요합니다. 형광 현미경에 사용되는 합성 형광단은 근자외선, 가시광선 및 근적외선 영역을 포함하는 방출 스펙트럼을 가지고 있습니다. 유전적으로 인코딩된 형광 단백질의 사용은 살아있는 세포 이미징에서 형광 현미경의 기능을 크게 확장하여 연구원이 관심 있는 세포 이하 영역을 정확하게 타겟팅할 수 있게 합니다.
Nuohai가 독자적으로 개발한 신형 광시트 조명 현미경인 Nuohai LS 18은 투명한 대형 조직 샘플의 고해상도 3D 이미징을 위해 특별히 설계되었으며 뇌, 비장, 소장과 같은 다양한 온전한 조직을 탐색하는 데 전념합니다. , 신장, 폐, 심장 및 종양. 장기의 3D 정밀 구조.
Widefield 형광에서 현미경 대물렌즈에 의해 수집된 전체 조리개 방출은 필요한 노출 시간을 최소화하면서 기록된 신호를 최대화합니다. 따라서 매우 짧은 조명 주기로 샘플을 이미지화할 수 있습니다. 광시야 이미징의 주요 단점은 배경 신호뿐만 아니라 초점면에서 멀리 떨어진 영역의 형광이 종종 관심 있는 기능을 가리는 원치 않는 빛이라는 것입니다. 따라서 광시야 이미징은 관심 있는 기능이 크거나(예: 소기관) 특성상 매우 점점이 많을 때 최상의 결과를 산출합니다. 부착 세포, 박테리아, 효모 및 매우 얇은 조직 절편을 포함한 다양한 살아있는 세포 샘플은 광시야 형광 이미징에 이상적인 후보이지만 더 두꺼운 조직(5미크론 이상)은 고급 방법 이미징에 가장 잘 사용됩니다.
합성 형광 염료, 양자점 및 형광 단백질을 사용한 형광 이미징에 많은 발전이 있었지만 경우에 따라 형광을 다른 이미징 양식과 결합하는 것이 도움이 됩니다. 예를 들어, DIC는 광시야형 형광과 함께 사용하여 특정 표지 대상에 대한 관심 현상을 연구하면서 세포 생존력 및 일반적인 형태를 모니터링할 수 있습니다. 단일 이미지에서 DIC와 형광을 획득하는 것은 일반적으로 비실용적이지만 적절하게 구성된 현미경에서는 두 기술을 순차적으로 사용할 수 있습니다. 따라서 표면형광 모드에서 이미징한 후 투과광을 사용하여 형광 표지된 샘플에서 DIC 이미지를 얻을 수 있습니다. 사후 분석 중에 두 이미지를 병합할 수 있습니다. 스펙트럼으로 분리된 조명(예: 가시광 및 근적외선)과 듀얼 카메라 또는 분할 보기 카메라 어댑터를 사용하는 고급 광시야 현미경 구성에서 DIC 및 형광 이미지의 동시 획득이 가능합니다. 대부분의 레이저 스캐닝 공초점 현미경에서는 형광 및 DIC 모드에서 이미지를 동시에 획득할 수 있으므로 획득 후 처리가 필요하지 않습니다. 위상차 및 Hoffman 변조 콘트라스트는 광시야 형광 현미경과 함께 사용할 수도 있습니다. 그러나 이러한 기술에서 대물 렌즈는 특별합니다. 위상 링이든 Hoffman 변조판이든 5-15퍼센트의 방출 강도 손실이 발생합니다.
기사 링크: 기기 장비 네트워크 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
