전자현미경을 위한 생물학적 시료 준비 및 관찰
현미경의 분해능은 사용하는 빛의 파장에 따라 달라지는데, 1933년부터 전자현미경이 등장하기 시작한 것은 전자빔의 가시광선보다 훨씬 짧은 파장을 광원으로 사용하기 때문에 분해능이 광학 현미경보다 훨씬 향상된 결과를 얻을 수 있습니다. 다른 광원은 또한 전자현미경과 광학현미경 사이의 일련의 차이점을 결정합니다.
전자빔의 이미징 원리와 시료의 역할의 차이에 따라 현대 전자현미경은 다양한 형태로 발전해 왔으며, 현재 * 일반적으로 사용되는 것은 투과전자현미경과 주사전자현미경입니다. 현미경의 경우, 전자는 변화 범위의 총 배율의 1,000-1,000,000배 범위에 있을 수 있고, 후자는 000-1,000,000 배의 총 배율 범위에 있을 수 있습니다. {4}},000 사이의 변화의 총 배율을 배합니다. 이 실험은 두 가지 유형의 현미경인 투과전자현미경과 주사전자현미경용 샘플 준비에 중점을 둡니다.
재료
1. 균주는 대장균(Escherichia coli, Escherichia coli) 사면.
2. 용액 또는 시약 아밀아세테이트, 농황산, 무수에탄올, 멸균수, 2% 인텅스텐산나트륨(pH 6.5-8.0) 수용액, 0.3% 폴리비닐 포름알데히드(트리클로로메탄에 용해됨) 용액, 시토크롬 c, 아세트산암모늄, 플라스미드 pBR322.
3. 기구 또는 기타 도구 일반 광학현미경, 구리망, 도자기 깔대기, 비이커, 평판 접시, 멸균 뷰렛, 멸균 핀셋, 란셋, 슬라이드, ** 계수판, 진공 코터, 임계점 건조기 등.
작업 단계
(I) 시료 준비 및 투과전자현미경 관찰
1. 금속메쉬 처리
관찰을 위해 광학 현미경용 샘플을 슬라이드 위에 놓습니다. 그러나 투과전자현미경에서는 전자가 유리판을 통과할 수 없기 때문에 일반적으로 캐리어 메쉬라고 불리는 메쉬 재료만 캐리어로 사용할 수 있습니다. 캐리어 메쉬는 재질과 형태에 따라 다양한 사양으로 구분될 수 있는데, 그 중 * 일반적으로 사용되는 것은 200-400 메쉬(구멍 수) 구리 메쉬입니다. 구리 메쉬는 사용하기 전에 처리하여 먼지를 제거하고 깨끗하게 유지해야 합니다. 그렇지 않으면 지지 필름의 품질과 표본 사진의 선명도에 영향을 미칠 것입니다. 본 실험에 사용된 구리 메쉬는 400 메쉬이며 다음과 같은 방법으로 처리할 수 있습니다. 먼저 아밀 아세테이트로 몇 시간 동안 표백한 다음 증류수로 여러 번 헹구고 무수 에탄올로 표백합니다. 탈수. 위의 방법으로 구리 메쉬가 여전히 깨끗하지 않은 경우 진한 황산(1:1)을 희석하여 1~2분 동안 담그거나 1% NaOH 용액에 몇 분 동안 끓인 다음 증류수로 여러 번 헹구는 데 사용할 수 있습니다. , 무수에탄올 탈수액에 넣어서 사용한다.
2. 지지필름 준비
샘플 관찰에서 캐리어 네트워크는 구조화되지 않은 균일한 필름 층으로 덮여 있어야 합니다. 그렇지 않으면 작은 샘플이 캐리어 네트워크의 구멍에서 누출됩니다. 이 필름 층을 일반적으로 지지 필름 또는 캐리어 필름이라고 합니다. 지지 필름은 전자에 투명해야 하며 두께는 일반적으로 20nm 미만이어야 합니다. 전자빔의 충격 하에서 필름은 어느 정도의 기계적 강도를 가져야 하며 구조의 안정성을 유지할 수 있으며 열 전도성이 좋습니다. 또한, 지지망은 전자현미경으로 볼 수 있는 구조가 없어야 하고, 운반된 시료와 화학반응이 없어 시료 관찰에 지장을 주지 않아야 하며, 그 두께는 일반적으로 15nm 정도이다. 지지 필름은 플라스틱 필름(예: 방화면 필름, 폴리에틸렌 포름알데히드 필름 등), 탄소 필름 또는 금속 필름(예: 베릴륨 필름 등)으로 만들 수 있습니다. 일상적인 작업 조건에서는 플라스틱 필름으로 요구 사항을 충족할 수 있지만 방화 면 접착 필름에서 플라스틱 필름을 준비하는 것은 상대적으로 쉽지만 강도는 폴리에틸렌 포름알데히드 필름만큼 강하지 않습니다.
