현미경 검사를 위한 일상적인 샘플 준비를 위한 요구 사항
공초점 현미경은 1980년대에 개발된 획기적인 첨단 신제품으로, 오늘날 분자생물학과 생명과학 분야에서 중요한 분석 장비 중 하나입니다. 공초점 현미경은 레이저 스캐닝 장치가 추가된 형광 현미경 이미징을 기반으로 하며 이미지 처리를 위해 컴퓨터를 사용하여 세포 또는 조직 내부의 미세 구조의 형광 이미지를 얻고 세포 이하 수준에서 많은 생리 신호 기계의 형태 변화를 관찰합니다. 형태학, 분자 세포 생물학, 신경 과학, 약리학, 유전학 및 기타 과학 분야의 강력한 연구 도구가 되십시오.
공초점 현미경 검사를 위한 샘플 준비는 검출 전에 중요한 단계입니다. 시료는 형광 프로브(단일, 이중, 삼중)로 라벨링해야 합니다.
그만큼
검체는 고정 조직 또는 살아있는 조직이거나 고정된 조직 또는 살아있는 부착 배양일 수 있습니다. 세포는 공초점 특수 소형 배양 접시 또는 커버슬립에서 배양해야 합니다. 세포를 일시 중단하고 슬라이스를 흔들거나 떨어뜨리고 커버슬립 커버 필름으로 덮습니다. 샘플의 Zda 두께는 약 1~2mm, 커버 글라스의 두께는 0.17mm 미만, 슬라이드 글라스의 두께는 0.8~1.2 mm이고 표면이 매끄럽고 두께가 균일하며 명백한 간섭 형광이 없습니다. 마운팅 매체는 고정 샘플에 자주 사용되며 pH 8의 PBS에서 제조된 글리세롤5-9은 일반적으로 마운팅에 사용됩니다.
일상적인 샘플 준비 요구 사항:
1. 염료의 선택
공초점 현미경은 단파장 레이저를 광원으로 사용하기 때문에 형광염료의 선택은 공초점 현미경에 장착된 레이저의 파장을 기준으로 해야 한다. 동일한 샘플에 여러 개의 형광 염료가 있는 경우 해당 염료의 방출 파장도 최대한 고려해야 합니다. 교차 색상 문제를 피하기 위해 겹치지 마십시오.
2. 샘플 캐리어의 선택
일반적으로 공초점 현미경의 고배율 대물 렌즈는 오일 렌즈이고 개구수가 작고 렌즈와 시료 사이의 작동 거리가 0.17mm를 넘지 않아야 합니다. 슬라이드와 커버슬립은 괜찮습니다. 부유 세포 또는 부유 입자인 경우 공초점 현미경 전용 페트리 접시를 사용하여 관찰용 시료를 운반할 수 있습니다.
3. 마운팅 매체 선택
샘플을 한 번만 관찰하면 되고 형광이 쉽게 소광되지 않는 경우 특정 농도의 글리세롤 혼합물을 선택하여 슬라이드를 밀봉할 수 있습니다. 샘플을 일정 시간 동안 배치하고 여러 번 촬영해야 하는 경우 형광 신호의 손실을 줄이기 위해 항형광 담금질 장착 매체를 선택해야 합니다.
