미생물 세포의 모양을 보기 위해 사용하는 현미경의 종류
개인이 육안으로 관찰하기 어려운 모든 작은 유기체를 총칭하는 용어. 미생물에는 박테리아, 바이러스, 곰팡이 및 몇 가지 조류가 포함됩니다. (단, 균류에 속하는 버섯, 영지버섯 등 일부 미생물은 육안으로 확인 가능) 생존은 살아있는 세포에 의존해야 합니다. 존재하는 다양한 환경에 따라 원핵미생물, 우주미생물, 진균미생물, 효모미생물, 해양미생물 등으로 나눌 수 있다.
미생물의 역할과 피해:
미생물이 인간에게 미치는 가장 중요한 영향 중 하나는 전염병의 확산입니다. 인간 질병의 50%는 바이러스에 의해 발생합니다. 인간의 질병을 일으키는 미생물의 역사는 인간과 미생물의 끊임없는 투쟁의 역사입니다. 인간은 질병의 예방과 치료에 큰 발전을 이루었지만 효과적인 치료제가 없는 수많은 바이러스성 질병과 같이 새로운 미생물 감염이 계속해서 발생하고 있습니다. 일부 질병의 발병 기전은 명확하지 않습니다. 많은 수의 광역 항생제 남용으로 강력한 선택압력이 발생하여 많은 균주가 돌연변이를 일으키고 약물 내성이 출현하게 되었으며 인류의 건강은 새로운 위협에 직면하게 되었습니다. 일부 분할된 바이러스는 재조합 또는 재배열을 통해 돌연변이를 일으킬 수 있습니다. 가장 대표적인 예가 인플루엔자 바이러스이다.
미생물의 구체적인 정의를 알게 된 후, 실험자는 미생물을 관찰할 때 어떤 종류의 현미경을 사용해야 하는지, 어떤 현미경을 사용해야 더 잘 볼 수 있는지, 일반적인 미생물 형태를 관찰하고 분석할 수 있습니다.
현미경의 발명은 맨눈으로는 볼 수 없는 웃는 물체를 볼 수 있게 된 것입니다. 미생물의 크기는 매우 작기 때문에 확대하여 현미경으로 관찰해야 합니다. 또한 미생물의 종류도 많기 때문에 기본적으로 대부분의 광학현미경이 미생물을 관찰하기 위해서는 어떤 종류의 현미경을 이용하여 미생물의 관찰과 분석을 해야 하는가가 다음 질문이다. 미생물 형태 관찰을 위한 일반적인 현미경에는 생물학적 현미경, 위상차 현미경, 도립 현미경, 형광 현미경 및 공초점 현미경이 포함됩니다. 현미경 등.
다음은 미생물 관찰에 사용되는 다양한 현미경에 대한 설명입니다.
1. 일반 광학현미경
광원은 자연광 또는 빛을 사용하며 파장은 약 {{0}}.4μm이다. 현미경의 해상도는 파장의 1/2, 즉 0.2μm이며 육안으로 볼 수 있는 가장 작은 이미지는 0.2mm입니다. 따라서 오일(침지) 거울을 사용하여 1000배 확대하면 0.2μm 입자를 육안으로 볼 수 있는 0.2mm로 확대할 수 있습니다. 일반 광학 현미경을 사용하여 박테리아, 방선균 및 진균류를 관찰할 수 있습니다.
2. 염색되지 않은 미생물의 형태와 움직임을 관찰하기 위해 암시야 현미경이 일반적으로 사용됩니다. 일반현미경에 암시야 집광기를 장착하면 빛이 중앙에서 직접 투과되지 않아 시야가 어둡다. 시료가 집광기 가장자리에서 비스듬한 빛을 받으면 흩어질 수 있어 어두운 시야 배경에서 세균이나 스피로헤타 같은 밝은 미생물을 관찰할 수 있다.
3. 위상차현미경 위상차현미경은 위상차판의 광효과를 이용하여 직접광의 광위상과 진폭을 변화시키고 광위상차를 광강도차이로 변환한다. 위상차현미경에서 빛이 염색되지 않은 표본을 통과할 때 표본의 다른 부분의 밀도 불일치로 인해 빛의 위상차가 발생하며 미생물의 형태, 내부 구조 및 이동 모드를 관찰할 수 있습니다.
4. 형광 현미경 형광 현미경은 기본적으로 일반 광학 현미경과 동일하며 주요 차이점은 광원, 필터 및 콘덴서입니다. 현재는 대부분 에피라이트(epi-light) 장치를 사용하고 있으며, 자외선이나 청자색광을 방출할 수 있는 광원으로 고압 수은 램프가 일반적으로 사용되고 있다. 필터에는 여기 필터와 흡수 필터의 두 가지 종류가 있습니다. 일반적인 명시야 집광기 외에, 암시야 집광기는 형광과 배경 사이의 대비를 향상시키기 위해 청색광을 사용하는 형광 현미경에도 사용할 수 있습니다. 이 방법은 형광 색소로 염색되거나 형광 항체와 결합된 박테리아의 검출 또는 식별에 적용할 수 있습니다.
5. 전자 현미경은 전자 흐름을 광원으로 사용합니다. 가시광선과 비교할 때 파장이 수만 배 차이가 나며 해상도가 크게 향상된다. 자기 코일은 광학 증폭 시스템으로 사용되며 배율은 수만 배 또는 수십만 배에 달할 수 있습니다. 바이러스 입자에 자주 사용됩니다. 그리고 세균 미세 구조의 관찰.
염색되지 않은 미생물 표본 관찰:
염색되지 않은 표본은 일반적으로 세균의 형태, 힘 및 움직임을 관찰하는 데 사용할 수 있습니다. 박테리아는 염색되지 않은 경우 무색 투명하며 주로 박테리아의 굴절률과 주변 환경의 차이로 현미경으로 관찰됩니다. 편모가 있는 세균은 활발하게 움직이는 반면, 편모가 없는 세균은 불규칙한 브라운 운동을 보입니다. Treponema pallidum, Leptospira 및 Campylobacter와 같은 생존 가능한 박테리아는 독특한 모양과 움직임 패턴을 가지고 있어 진단에 중요합니다. 일반적으로 사용되는 방법은 압력 강하 방법, 펜던트 드롭 방법 및 모세관 방법입니다.
1. 행잉 드롭 방법 깨끗한 오목 유리 슬라이드의 오목한 구멍 주위에 바셀린을 바르고 접종 루프가 있는 세균 현탁액의 고리를 취하여 커버 글라스의 중앙에 놓은 다음 오목 유리 슬라이드의 오목한 구멍을 커버글라스 중앙에 물방울을 떨어뜨린 후 커버를 씌운 후 재빨리 뒤집고 커버슬립을 가볍게 눌러 오목한 구멍 가장자리의 바셀린에 밀착되도록 한 다음 고배율 아래에서 관찰한다. 현미경(또는 암시야).
2. 접종 고리가 있는 세균 부유액의 고리를 취하여 압력 강하법으로 깨끗한 유리 슬라이드 중앙에 놓고 세균 부유액을 커버 글라스로 부드럽게 덮습니다. 범람에서 세균 현탁액. 고배율 렌즈로 명시야(또는 암시야) 관찰.
3. 모세관법은 주로 혐기성세균의 동역학 검사에 사용된다. 보통 60~70mm 길이를 선택합니다. 구멍이 0.5-1.0mm인 모세관을 통해 혐기성 세균 현탁액을 흡입한 후 모세관의 두 끝을 화염으로 밀봉합니다. 모세관을 플라스틱 종이로 유리 슬라이드에 고정하고 암시야에서 고배율 렌즈로 관찰하였다.
염색된 미생물 표본을 현미경으로 관찰:
세균 표본을 염색한 후 세균과 주변 환경 사이의 선명한 색상 대비로 인해 세균의 형태학적 특성(예: 크기, 모양, 배열 등) 및 일부 특수 구조가 나타날 수 있습니다. 일반 광학현미경(캡슐, 편모, 포자 등) 하에서 명확하게 관찰되며, 염색 반응성에 따라 세균을 분류 및 동정할 수 있다.
(1) 세균 염색의 일반적인 절차 세균 염색의 일반적인 절차는 도말(건조)-고정-염색입니다.
1. 혈액, 분비물, 배설물, 천자액 및 액체 배양액의 도말 준비 및 유리 슬라이드에 직접 박막 도말; 부검 또는 감염된 동물 조직의 경우 샘플링을 위해 면봉으로 병변을 문지릅니다. 고체 배지에 박테리아 콜로니 또는 잔디를 준비하려면 먼저 접종 루프를 사용하여 생리 식염수 링을 가져 와서 슬라이드 중앙에 놓은 다음 멸균 접종 루프를 사용하여 소량의 배양액을 취하고 분쇄하십시오 일반 식염수에 고르게 펴 바르고 1cm2로 펴 바릅니다. 크거나 작은 페인트 표면은 실온에서 자연 건조하거나 멀리서 천천히 건조하십시오.
2. 고정의 목적은 박테리아를 죽이고 박테리아 단백질과 구조를 응고시키고 염색을 용이하게 하는 것입니다. 세척 중에 박테리아가 물에 의해 씻겨 나가지 않도록 슬라이드에 부착하도록 촉진합니다. 염료에 대한 박테리아의 투과성을 변경하여 염색의 박테리아 세포 구조에 유익합니다. 보통 화염으로 가열하여 고정하며, 건조된 도말물을 화염에 빠르게 3회 통과시킨다. 슬라이드에 닿았을 때 손등의 피부를 태우지 않는 것이 좋습니다.
3. 염색 다른 검사 목적에 따라 염색을 위한 다른 염색 방법을 선택하십시오. 염색 시 염색액을 한 방울씩 떨어뜨려 커버력을 높인다.
4. 매염제 염료와 염색물의 친화력을 높이고 염색물에 염료를 고정시켜 세포막의 투과성을 변화시키는 물질을 매염제라고 한다. 일반적으로 명반, 탄닌산, 금속염, 요오드 등이 사용되며 착색을 촉진하기 위해 가열도 사용된다. 매염제는 1차 염색과 대조 염색 사이에 사용할 수 있으며 고정 후 사용하거나 고정액과 염색에 함유할 수도 있습니다.
5. 탈색 염색된 물체의 색을 제거할 수 있는 화학 약품을 탈색제라고 합니다. 에탄올, 아세톤 등은 일반적으로 탈색제로 사용됩니다. 탈색제는 박테리아와 염료의 조합의 안정성 정도를 감지할 수 있으며, 이는 감별 염색에 사용할 수 있습니다.
6. 대비염색 탈색된 박테리아 또는 그 구조는 종종 쉽게 관찰할 수 있도록 대비염색 용액으로 대비염색됩니다. 대비염색액의 색상은 1차 염색액의 색상과 달라 선명한 대비를 이룬다. 대조 염색은 초기 염색의 색상을 가리지 않도록 너무 강하지 않아야 합니다.
