레이저 스캐닝 다광자 현미경 개선의 장점
레이저 스캐닝 다광자 현미경은 광학 현미경의 획기적인 개선으로, 주로 살아있는 세포, 고정 세포 및 조직의 깊은 구조를 관찰하고 명확하고 선명한 다{0}}층 Z-면 구조, 즉 광학 슬라이스를 얻을 수 있는 능력에서 나타납니다. 이는 표본의 3{2}차원 고체 구조를 구성하는 데 사용할 수 있습니다. 공초점현미경은 레이저 광원을 사용하는데, 레이저 광원이 대물렌즈의 초점면 전체를 채울 정도로 확대된 후 대물렌즈의 렌즈계를 통해 시료의 초점면의 아주 작은 점들로 수렴됩니다. 대물렌즈의 개구수에 따르면 밝은 조명점의 직경은 약 0.25-0.8μm이고 깊이는 약 0.5-1.5μm입니다. 공초점의 크기는 현미경 설계, 레이저 파장, 대물렌즈 특성, 스캐닝 장치 상태 설정 및 표본 속성에 따라 결정됩니다. 필드 현미경의 조명 범위와 깊이는 큰 반면, 공초점 현미경의 조명은 초점면의 초점에 초점이 맞춰집니다. 공초점 현미경의 기본 장점은 두께가 약 0.5~1.5μm인 두꺼운 형광 표본(최대 50μm 이상)에 대해 미세한 광학 절편을 수행할 수 있다는 것입니다. 일련의 광학 슬라이스 이미지는 현미경의 Z-축 스테퍼 모터를 사용하여 표본을 위아래로 이동하여 얻을 수 있습니다. 이미지 정보 수집은 표본의 다른 위치에서 방출되는 신호의 간섭 없이 * * 평면 내에서 제어됩니다. 배경 형광의 영향을 제거하고 신호 대 잡음비를 높인 후 공초점 이미지의 대비와 해상도는 기존 필드 조명 형광 이미지에 비해 크게 향상됩니다. 많은 표본에서 복잡한 구조적 구성 요소가 서로 얽혀 복잡한 시스템을 형성하지만 일단 충분한 광학 섹션이 수집되면 소프트웨어를 사용하여 이를 3차원으로 재구성할 수 있습니다. 이 실험 방법은 세포나 조직 사이의 복잡한 구조적, 기능적 관계를 밝히기 위해 생물학적 연구에 널리 사용되어 왔습니다.
