형광현미경과 일반 광학현미경의 차이점 및 특징
형광현미경은 일반 광학현미경과 다릅니다. 일반적인 광원의 조명을 통해서는 시료를 관찰하지 않습니다. 대신 특정 파장(보통 자외선, 청자색광)의 빛을 이용해 현미경으로 관찰한 시료 속 형광물질을 여기시켜 형광을 발산시키는 방식이다. 따라서 형광현미경의 광원은 직접적인 조명의 역할을 하는 것이 아니라, 시료 내부의 형광물질을 여기시키는 에너지원의 역할을 한다. 우리가 표본을 관찰할 수 있는 이유는 광원의 조명 때문이 아니라, 표본 내의 형광물질이 여기된 빛에너지를 흡수하여 발생하는 형광현상 때문이다. 형광현미경의 주요 특징은 광원이 특정 파장 범위의 여기광을 다량 공급할 수 있어 검사 대상 시료의 형광 물질이 필요한 여기광 강도를 얻을 수 있다는 점임을 알 수 있습니다. 동시에, 형광현미경에는 상응하는 필터 시스템이 있어야 합니다. 형광 현미경 검사법은 고급 형광 조직화학을 위한 필수 도구입니다. 초고압 광원, 필터 시스템(여기 및 억제 필터 플레이트 포함), 광학 시스템 및 사진 시스템으로 구성됩니다. 특정 파장의 빛을 사용하여 시료를 자극하여 형광을 방출합니다.
1. 형광을 여기시키는 방법: 빛의 파장 범위에 따라 UV 여기 방식(자외선 조명 방식 사용)과 BV 여기 방식(청자색 광 사용)의 두 가지 유형으로 구분됩니다. UV 여기 방법은 여기를 위해 400nm보다 짧은 근자외선을 사용합니다. 이 방법에서는 가시적인 여기광이 없으므로 관찰된 형광은 염료 고유의 형광을 나타내므로 표본의 특정 형광과 배경 조직의 자가형광을 쉽게 구별할 수 있습니다.
2. BV 여기 방법: 404nm 및 434nm를 중심으로 자외선에서 청색광까지 여기됩니다. 이 방식은 청색광을 사용하여 검체를 조명하므로, 형광관측시스템의 차단필터는 청색광을 완전히 차단하고, 요구되는 녹색 및 황색 형광을 완전히 통과시킬 수 있는 필터를 사용해야 한다. 형광 항체 방법에 사용되는 형광 염료. 여기광의 최대 흡수 파장과 형광의 최대 방출 파장은 상대적으로 가깝기 때문에 BV 여기 방법에 사용되는 필터는 날카로운 차단 필터를 사용해야 합니다. 이 방법은 청색광을 여기광으로 사용할 수 있어 형광안료의 흡수효율이 더 높고, 더 밝은 이미지를 얻을 수 있다. 단점은 500nm 이하의 형광은 볼 수 없는 반면, 500nm 이상의 형광은 이미지 전체가 노란색으로 보인다는 점입니다. 형광항체법에서는 형광염료의 특이성을 대부분 그 특유의 색깔로 판단한다. 따라서 미묘한 특이성을 논의할 때 위에서 언급한 BV 여기 방법의 단점은 종종 큰 영향을 미칩니다.
