미생물에 대한 현미경으로 직접 계수
실험 원리
hemocytometer를 사용하여 현미경으로 직접 계수하는 것은 일반적으로 사용되는 미생물 계수 방법입니다. 이 방법의 장점은 직관적이고 빠르다는 것입니다. 적절하게 희석된 세균 현탁액(또는 포자 현탁액)을 슬라이드와 혈구계산기의 커버 글래스 사이의 계수실에 놓고 현미경으로 계수합니다. 계수실의 부피는 고정되어 있으므로(0.1mm2) 현미경으로 관찰되는 미생물의 수에 따라 단위 부피당 미생물의 총수로 환산할 수 있다. 이 방법은 살아있는 박테리아와 죽은 박테리아의 합을 계산하기 때문에 총 박테리아 수 방법이라고도 합니다.
혈구계산기는 일반적으로 4개의 홈이 3개의 플랫폼을 형성하는 특수 유리 슬라이드입니다. 중간에 있는 플랫폼은 짧은 수평 홈에 의해 두 부분으로 나뉩니다. 양쪽 플랫폼에는 그리드가 새겨져 있습니다. 각 그리드는 9개의 큰 사각형으로 나뉩니다. 중앙의 큰 광장은 계산실입니다. 미생물은 계수실에서 계수됩니다. 혈구계수판의 구조는 그림Ⅷ-1과 같다.
계수실의 규모는 일반적으로 두 가지 사양이 있는데, 하나는 큰 사각형을 16개의 중간 사각형으로 나누고 각 중간 사각형을 25개의 작은 사각형으로 나누는 것입니다(그림 Ⅷ-2). 다른 하나는 큰 사각형입니다. 사각형은 25개의 중간 사각형으로 나뉘고 각 중간 사각형은 16개의 작은 사각형으로 나뉩니다(그림 Ⅷ-1, C). 그러나 어떤 종류의 계수판이든 각 큰 사각형의 작은 사각형의 수는 동일합니다. 즉, 그림 Ⅷ-2에서와 같이 16×25=400개의 작은 사각형입니다.
각 큰 정사각형의 한 변의 길이는 1mm이고 각 큰 정사각형의 면적은 1mm2입니다. 커버 글라스를 덮은 후 슬라이드 글라스와 커버 글라스 사이의 높이는 0.1mm이므로 계수실의 부피는 0.1mm3입니다.
계수할 때 보통 5개의 중간 사각형에 있는 총 박테리아 수를 세고 각 중앙 사각형의 평균값을 구한 다음 16 또는 25를 곱하여 큰 사각형에 있는 총 박테리아 수를 얻은 다음 다음으로 변환합니다. 1ml 세균 용액에 들어 있는 총 세균 수.
실험실 장비
혈구계산기, 현미경, 커버슬립, 멸균 모세관;
실험재료
Saccharomyces cerevisiae 현탁액
실험 절차(미생물 현미경 직접 계수 방법)
1. 희석
Saccharomyces cerevisiae 현탁액을 적절하게 희석합니다. 박테리아 용액이 걸쭉하지 않으면 희석할 필요가 없습니다.
2. 현미경 계수실
샘플을 추가하기 전에 계수판의 계수 챔버를 현미경으로 검사합니다. 먼지가 있으면 계산하기 전에 청소해야 합니다.
3. 샘플 추가
깨끗하고 건조한 혈구계측판을 커버글라스로 덮은 다음 멸균된 미세입 점적기를 사용하여 커버글라스 가장자리에서 희석된 Saccharomyces cerevisiae 용액 한 방울을 너무 많이 떨어뜨리지 않도록 합니다. 간격을 따라 간격에 가깝습니다. 모세관 삼투는 자체적으로 계수 챔버에 들어가고 일반 계수 챔버는 박테리아 액체로 채워질 수 있습니다. 기포가 생기지 않도록 주의하세요.
4. 현미경 수
5분간 휴식을 취한 후 hemocytometer를 현미경의 대 위에 놓고 먼저 저배율 렌즈를 사용하여 계수실의 위치를 찾은 다음 고배율 렌즈로 전환하여 계수한다. 계수하기 전에 세균 용액이 너무 걸쭉하거나 너무 묽은 것으로 밝혀지면 계수하기 전에 희석을 다시 조정해야 합니다. 일반적으로 샘플 희석에는 각 세포에 약 5-10개의 박테리아가 필요합니다. 각 계수 챔버는 계수를 위해 5개의 중간 격자(선택 사항인 4개의 모서리 및 중앙 격자)에서 박테리아를 선택합니다. 그리드 선의 박테리아는 일반적으로 위쪽 및 오른쪽 선에서만 계산됩니다. 효모 발아의 경우 새싹 몸체의 크기가 모세포의 절반에 도달하면 2개의 세균을 센다. 두 개의 계수 챔버에서 계수된 값에서 샘플의 세균 함량을 계산하기 위해 샘플을 계수합니다.
5. 혈구계 청소
사용 후에는 꼭지의 혈구계수판을 물줄기로 헹구고, 딱딱한 물건으로 씻지 말고, 씻은 후에는 스스로 말리거나 헤어드라이어로 말리십시오. 현미경 검사, 각 세포에 잔류 박테리아 또는 기타 침전물이 있는지 관찰하십시오. 깨끗하지 않으면 깨끗해질 때까지 반복해서 씻어야 합니다.
