미생물 수 측정-현미경 직접계수법!
세균 집단의 성장은 세포 수의 증가 또는 세포 물질의 증가로 나타납니다. 세포 수를 결정하는 방법에는 직접 현미경 계수, 플레이트 계수, 분광 광도계에 의한 탁도 추정, 최대 확률 MPN 및 막 여과가 포함됩니다. (막 여과) 등. 세포 물질을 측정하는 방법에는 세포 건조 중량 측정, 질소 함량, RNA 및 DNA 함량과 같은 특정 세포 구성 요소 측정, 대사 산물 측정이 포함됩니다. 간단히 말해서, 미생물 성장을 측정하는 방법에는 여러 가지가 있으며 각각 고유한 장점과 단점이 있습니다. 작업의 특정 요구 사항에 따라 방법을 선택해야 합니다. 본 실험에서는 주로 생산 및 과학연구 작업에서 일반적으로 사용되는 현미경 직접계수법을 소개합니다.
1. 목적요건
1. 혈구계산판을 이용하여 계수의 원리를 명확히 한다.
2. 혈구계수판을 이용한 미생물 계수법을 익힌다.
2. 기본원리
현미경 직접계수법은 검사할 시료의 소량의 현탁액을 면적과 부피가 정해진 특수 슬라이드(세균계라고도 함)에 놓고 현미경 아래에서 직접 계수하는 간단하고 빠르며 직관적인 방법입니다. 행동 양식. 현재 국내외에서 일반적으로 사용되는 세균계에는 혈구계, Peteroff-Hauser 세균계, Hawksley 세균계 등이 있습니다. 모두 효모, 박테리아, 곰팡이 포자 및 기타 현탁액을 계산하는 데 사용할 수 있으며 기본 원리는 동일합니다. 후자의 두 세균 계수기는 커버 유리로 덮은 후 총 부피가 0.02mm3이며, 커버 유리와 슬라이드 사이의 거리는 0.02mm에 불과합니다. 따라서 유침형 대물렌즈를 사용하여 박테리아와 같은 작은 세포를 관찰하고 검출할 수 있습니다. 세다. 이러한 세균계를 사용하는 것 외에도 현미경으로 도말 면적과 시야 면적의 비율을 직접 관찰하는 추정 방법도 있습니다. 이 방법은 일반적으로 우유의 세균학적 검사에 사용됩니다. 현미경 직접 계수 방법의 장점은 직관적이고 빠르며 조작이 쉽다는 것입니다. 그러나 이 방법의 단점은 측정 결과가 대개 죽은 균과 살아있는 균의 합이라는 점이다. 현재 이러한 단점을 극복하기 위한 방법으로는 생존균 염색 마이크로챔버 배양(단시간)과 세포분열 억제제를 첨가하여 생존균만을 계수하는 목적을 달성하는 등 몇 가지 방법이 있습니다.
이 실험에서는 혈구계산기를 예로 들어 현미경으로 직접 계수를 수행합니다. 다른 두 세균 측정기의 사용에 대해서는 각 제조업체의 지침을 참조하십시오. 혈구계산기를 사용하여 현미경으로 직접 계수하는 방법은 일반적으로 사용되는 미생물 계수 방법입니다. 계수판은 3개의 플랫폼을 형성하는 4개의 홈이 있는 특수 슬라이드입니다. 중앙의 더 넓은 플랫폼은 짧은 수평 홈에 의해 두 부분으로 나뉘며 플랫폼의 각 측면에는 격자 격자가 있습니다. 각 정사각형 격자는 9개의 큰 정사각형으로 나누어져 있으며 중앙의 큰 정사각형은 계산실입니다. 혈구 계수판의 구조는 그림 {{0}}에 나와 있습니다. 계수실의 규모에는 일반적으로 두 가지 사양이 있습니다. 하나는 큰 정사각형이 25개의 중간 정사각형으로 나누어지고, 각 중간 정사각형은 16개의 작은 정사각형으로 나누어진 것입니다(그림15-2). 다른 하나는 큰 광장입니다. 정사각형 격자는 16개의 중간 정사각형으로 나뉘며, 각 중간 정사각형은 25개의 작은 정사각형으로 나뉩니다. 그러나 어떤 종류의 계산판이든지 큰 정사각형 하나당 400개의 작은 정사각형이 있습니다. 각 큰 정사각형의 변 길이는 1mm이고, 각 큰 정사각형의 면적은 1mm2입니다. 커버슬립을 덮은 후 커버슬립과 슬라이드 사이의 높이가 0.1mm이므로 계수실의 부피는 0.1mm3(1만분의 1밀리리터)입니다. 그림15-1 혈구계수판의 구조(1) 그림15-2 혈구계수판의 구조(2) A. 정면도; B. 종단면; 확대된 정사각형 격자, 중앙의 큰 정사각형은 계수실입니다. 1. 혈액 세포 계수판; 2. 표지 전표; 3. 계수실에서 셀 때 일반적으로 다섯 개의 사각형에 있는 총 박테리아 수를 세고 각 사각형의 평균값을 구한 다음 25 또는 16을 곱하여 큰 사각형에 있는 총 박테리아 수를 환산합니다. 박테리아 용액 1ml에 들어있는 총 박테리아 수를 계산합니다. 가운데 5개의 사각형에 있는 총 박테리아 수를 A라고 하고, 박테리아 용액의 희석 인자를 B라고 가정합니다. 가운데 25개의 사각형이 있는 계수판이라면 박테리아 용액 1mL에 들어 있는 총 박테리아 수 {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (개) 마찬가지로 16개의 정사각형으로 된 계수판이라면 세균용액 1mL에 들어있는 총 세균수 {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B(개),,
