형광현미경과 일반 광학현미경의 차이점
형광현미경은 기존의 광학현미경과 다릅니다. 일반적인 광원의 빛으로 표본을 관찰하는 대신, 특정 파장의 빛(보통 자외선이나 청자색광)을 이용해 현미경 슬라이드에 있는 표본 내의 형광 물질을 여기시켜 이들 물질이 형광을 발하게 하는 방식이다. 따라서 형광현미경의 광원은 표본을 직접 조명하지 않습니다. 이는 검체 내 내인성 형광 물질을 자극하는 에너지원으로 작용합니다. 우리가 표본을 볼 수 있는 이유는 광원 자체의 조명 때문이 아니라 표본 내부의 형광물질이 여기광 에너지를 흡수한 후 형광을 방출하기 때문이다.
따라서 형광 현미경의 주요 특징은 광원이 특정 파장 대역의 여기광을 공급할 수 있어 검사 대상 시료의 형광 물질이 충분한 강도의 형광을 방출할 수 있다는 것입니다. 한편, 형광 현미경에는 해당 필터 시스템이 장착되어 있어야 합니다. 이는 형광 조직화학에 필수적인 도구입니다. 형광 현미경은 주로 초고압 광원, 필터 시스템(여기 필터 및 배리어 필터 포함), 광학 시스템 및 사진 시스템으로 구성됩니다. 특정 파장의 빛을 사용하여 형광 물질을 여기시키는 방식으로 작동합니다.
① 형광 여기 방법 여기광의 파장 범위에 따라 UV 여기 방식(자외선 조명 방식)과 BV 여기 방식(청자색 조명 방식)의 두 가지가 있다. UV 여기 방식은 400nm보다 짧은 자외선을 여기용으로 사용한다. 눈에 보이지 않는 형광을 발생시키므로 관찰된 형광은 표본 자체에서 나옵니다. 이 방법은 배경의 자가형광과 특정 형광을 쉽게 구별합니다.
② BV 여기 방법 BV 여기 방법은 404nm와 434nm를 중심으로 보라색부터 파란색까지의 여기광을 사용합니다. 청색광을 사용하여 검체를 조사하므로 이 방법의 여기 필터 시스템은 청색광을 완전히 차단하고 필요한 녹색 및 황색광만 통과시켜야 합니다. 형광 항체 염색의 경우 여기광의 최대 흡수 파장은 형광 염료의 최대 방출 파장에 가깝습니다. 이러한 이유로 BV 여기용 필터 세트는 차단 배리어 필터를 사용해야 합니다. 이 방법은 여기를 위해 청색광을 사용하므로 형광 수집 효율이 상대적으로 높고 더 밝은 이미지를 얻을 수 있습니다. 단점은 500 nm 이상의 형광은 감지할 수 없으며 500 nm 이상에서는 황록색 이미지만 볼 수 있다는 것입니다. 형광 항체 염색에서 특이성 판단은 색상 정보에 크게 의존하므로 BV 여기 방법의 단점은 미묘한 특이성을 논의할 때 주요 제한 사항이 될 수 있습니다.
