전자현미경을 위한 생물학적 표본의 준비 및 관찰
현미경의 분해능은 사용하는 빛의 파장에 따라 달라집니다. 1933년 등장한 전자현미경은 가시광선보다 파장이 훨씬 짧은 전자빔을 광원으로 사용한다. 따라서 광학 현미경보다 훨씬 높은 해상도를 달성합니다. 광원의 차이는 또한 전자현미경과 광학현미경 사이에 일련의 구별을 가져옵니다.
전자빔 이미징 원리와 샘플과 상호 작용하는 방식의 차이를 기반으로 현대 전자 현미경은 다양한 유형으로 발전했습니다. 가장 널리 사용되는 것은 투과전자현미경(TEM)과 주사전자현미경(SEM)이다. 전자의 총 배율은 1000~100만배이고, 후자의 배율은 20~30만배이다. 이 실험에서는 주로 투과전자현미경과 주사전자현미경을 위한 시료 준비를 소개합니다.
II. 장치 및 시약
① 세균주 :대장균경사문화. ② 용액 또는 시약 : 아밀아세테이트, 진한황산, 무수에탄올, 멸균수, 2% 인산텅스텐산나트륨수용액(pH 6.5~8.0), 0.3% 폴리비닐포르말(클로로포름에 용해)용액, 시토크롬c, 아세트산암모늄, 플라스미드 pBR322. ③ 기구 및 소모품 : 일반광학현미경, 구리격자, 세라믹 깔대기, 비이커, 페트리 접시, 멸균 점적기, 멸균 겸자, 해부바늘, 유리슬라이드, 계수실, 진공증발기, 임계점 건조기 등
III. 운영 절차
(A) 투과전자현미경을 위한 시료 준비 및 관찰
① 금속격자의 처리 광학현미경용 시료를 유리슬라이드에서 관찰합니다. 그러나 투과전자현미경의 경우 전자가 유리 슬라이드를 통과할 수 없으므로 지지 그리드라고 불리는 메쉬 재료가 샘플 캐리어로 사용됩니다. 지지 그리드는 재질과 모양에 따라 다양한 사양으로 제공됩니다. 200-400 메시의 구리 그리드가 가장 일반적으로 사용됩니다. 구리 그리드는 오염 물질을 제거하기 위해 사용하기 전에 미리 세척해야 합니다. 그렇지 않으면 지지 필름의 품질과 표본 현미경 사진의 선명도가 영향을 받습니다. 본 실험에서는 400메시 구리 그리드를 채택했으며 처리 단계는 다음과 같습니다. 먼저 구리 그리드를 아밀 아세테이트에 몇 시간 동안 담근 다음 증류수로 여러 번 헹구고 무수 에탄올로 탈수합니다. 위 처리 후에도 구리 그리드가 여전히 더러운 경우에는 희석된 진한 황산(1:1)에 1~2분간 담그거나 1% NaOH 용액에 몇 분간 끓입니다. 증류수로 반복적으로 헹군 후, 무수에탄올에 탈수하여 대기상태로 사용합니다.
