형광현미경의 원리, 특성 및 응용
형광현미경의 원리 및 구조적 특징 : 형광현미경은 발광효율이 높은 점광원을 사용하여 일정한 파장의 빛(자외선 3650인치 또는 자청광 4200인치 등)을 필터시스템을 통해 여기로 방출 표본의 형광을 자극하는 빛. 물질이 다양한 색의 형광을 낸 후 대물렌즈와 접안렌즈의 배율을 통해 관찰한다. 이와 같이 강한 콘트라스트 배경 하에서는 형광이 매우 약하더라도 식별이 쉽고 감도가 높다. 주로 세포의 구조와 기능, 화학성분 연구에 사용된다. 형광 현미경의 기본 구조는 일반 광학 현미경과 몇 가지 액세서리(예: 형광 광원, 여기 필터, 2색 빔 스플리터 및 차단 필터 등)로 구성됩니다. 형광 광원 - 일반적으로 다양한 파장의 빛을 방출할 수 있는 초고압 수은 램프(50-200W)를 사용하지만 각각의 형광체는 가장 강한 형광을 내는 여기 파장을 가지므로 여기 필터( 일반적으로, 자외선, 보라색, 파란색 및 녹색 여기 필터가 있음) 특정 파장의 여기광만 통과시켜 시편을 조사하고 다른 빛은 흡수합니다. 각 물질에 여기광을 조사한 후 매우 짧은 시간에 조사 파장보다 긴 파장의 가시광선 형광을 방출합니다. 형광은 특이하고 일반적으로 여기광보다 약합니다. 특정 형광을 관찰하기 위해서는 대물 렌즈 뒤에 차단(또는 억제) 필터가 필요합니다.
그것은 두 가지 기능을 가지고 있습니다: 하나는 형광을 방해하고 눈을 손상시키지 않도록 접안 렌즈에 들어가는 여기 빛을 흡수하고 차단하는 것입니다. 다른 하나는 특정 형광을 선택하여 통과시켜 특정 형광 색상을 표시하는 것입니다. 두 필터는 함께 사용해야 합니다.
광학 경로 측면에서 두 가지 유형의 형광 현미경이 있습니다.
1. 투과형광현미경: 여기광원을 집광렌즈를 통해 시편물질에 통과시켜 형광을 여기시킨다. 암시야 컬렉터가 일반적으로 사용되며 일반 컬렉터를 사용하여 거울을 조정하여 여기광이 방향을 바꾸고 표본으로 바이패스되도록 할 수 있습니다. 이것은 오래된 형광 현미경입니다. 저배율에서 형광이 강하다는 장점이 있지만, 배율이 높아질수록 형광이 약해지는 단점이 있다. 따라서 더 큰 표본 재료를 관찰하는 것이 좋습니다.
2. 에피형광현미경(Epi-fluorescence microscope)은 현대에 와서 개발된 새로운 형태의 형광현미경이다. 차이점은 여기광이 대물렌즈에서 시료 표면으로 떨어지는 것, 즉 동일한 대물렌즈가 조명 집광기와 형광을 수집하는 대물렌즈로 사용된다는 것입니다. 가벼운 우라늄에서 45도 떨어진 광 경로에 이색성 빔 스플리터를 추가해야 합니다. 여기광은 대물렌즈로 반사되어 시료에 수집됩니다. 시료에서 발생한 형광과 대물렌즈의 렌즈면과 커버글라스 표면에서 반사된 여기광이 대물렌즈에 동시에 입사하고 2색 빔스플리터로 되돌아와 여기광을 형광과 분리 , 잔류 여기광은 차단 필터에 의해 흡수됩니다. 다른 여기 필터/2색 빔 스플리터/차단 필터의 조합으로 변경하는 등 다양한 형광 반응 제품의 요구를 충족할 수 있습니다. 이러한 종류의 형광 현미경의 장점은 시야의 조명이 균일하고 이미징이 선명하며 배율이 클수록 형광이 강하다는 것입니다.
형광현미경 사용법
1. 광원을 켜고 초고압 수은 램프가 가장 밝은 지점에 도달하려면 몇 분 동안 예열해야 합니다.
2. 투과 형광 현미경은 광원과 콘덴서 사이에 필요한 여기 필터를 설치하고 대물 렌즈 뒤에 해당 차단 필터를 설치해야 합니다. Epi-형광 현미경은 필요한 여기 필터/이중 색상 빔 스플리터/블로킹 필터 삽입물을 광학 경로의 슬롯에 삽입해야 합니다.
3. 저배율 렌즈로 관찰하고 형광현미경의 다른 모델의 조정장치에 따라 전체 조명점의 중앙에 위치하도록 광원의 중심을 조정한다.
4. 시편을 놓고 초점을 맞춘 후 관찰한다. 사용 중에 주의를 기울여야 합니다. 눈 손상을 일으키지 않도록 엔드 필터로 직접 관찰하지 마십시오. 오일 렌즈로 표본을 관찰할 때는 형광이 없는 특수 오일 렌즈를 사용해야 합니다. 고압 수은 램프를 끈 후에는 즉시 다시 켤 수 없으며 테스트가 필요합니다. 5분 후에 다시 시작할 수 있습니다. 그렇지 않으면 불안정해지고 수은 램프의 수명에 영향을 미칩니다.
