형광현미경과 기존 광학현미경의 비교 및 특징
형광현미경은 일반 광학현미경과 다릅니다. 기존 광원의 조명 하에서 시료를 관찰하는 대신 특정 파장의 빛(보통 자외선 또는 청자색광)을 사용하여 시료 내의 형광 물질을 여기시켜 형광을 방출하게 합니다. 따라서 형광현미경의 광원은 직접 조명하는 역할을 하지 않습니다. 이는 검체 내 내인성 형광 물질을 여기시키는 에너지원으로 작용합니다. 광원에서 나오는 빛에 의해서가 아니라, 여기광을 흡수한 후 시료에 있는 형광물질이 발산하는 형광으로 인해 시료를 관찰할 수 있습니다.
따라서 형광현미경의 주요 특징은 특정 파장 범위 내에서 풍부한 여기광을 공급하여 테스트 표본의 형광 물질에 충분한 여기 강도를 제공할 수 있는 광원입니다. 한편, 형광 현미경에는 해당 필터 시스템이 장착되어 있어야 합니다. 형광 조직화학을 위한 필수 도구로서 주로 초고압 광원, 필터 세트(여기 필터 및 장벽 필터 포함), 광학 시스템 및 사진 시스템으로 구성됩니다. 특정 파장의 빛으로 표본을 자극하여 형광을 생성하는 방식으로 작동합니다.
형광 여기 방법: 파장 범위에 따라 UV 여기(자외선 조명 방법)와 BV 여기(청자색광 방법)로 분류됩니다. UV 여기는 여기를 위해 400nm보다 짧은 근자외선을 사용합니다. 가시적인 여기광은 포함되지 않으므로 관찰된 형광은 염료 고유의 형광을 나타냅니다. 이를 통해 표본의 특정 형광과 배경 조직의 자가형광을 쉽게 구별할 수 있습니다.
BV 여기 방법: 404 nm 및 434 nm를 중심으로 자외선에서 청색광까지의 빛으로 여기를 수행합니다. 이 방법에서는 청색광이 시료에 조사되기 때문에 형광관측시스템의 차단필터는 청색광을 완전히 차단하면서 필요한 녹색 및 황색 형광을 충분히 투과시켜야 합니다. 이 방법은 형광 항체 기술에 사용되는 형광 색소에 적용됩니다. 여기광의 최대 흡수 파장과 형광의 최대 방출 파장은 상대적으로 가깝기 때문에 BV 여기에는 날카로운 필터가 필요합니다. 여기서는 청색광을 여기광으로 사용하여 형광색소의 흡수 효율을 높이고 더 밝은 이미지를 생성합니다. 단점은 500 nm 미만의 형광은 감지할 수 없으며 500 nm 이상의 신호는 전체 이미지에 노란색 색조를 준다는 것입니다. 형광 항체 분석에서 특이성은 대부분 형광 색소의 특징적인 색상으로 판단됩니다. 따라서 미묘한 특이성을 평가할 때 BV 여기 방법의 위 단점이 상당한 영향을 미칠 수 있습니다.
