형광현미경과 일반광현미경의 비교 및 특징
형광현미경은 일반 광학현미경과 다릅니다. 기존 광원의 조명 하에서 표본을 관찰하는 대신 특정 파장의 빛(보통 자외선 또는 청자색광)을 사용하여 현미경의 표본 내 형광 물질을 여기시켜 형광을 방출하게 합니다. 따라서 형광현미경의 광원은 직접 조명하는 역할을 하지 않습니다. 이는 검체 내 내인성 형광 물질을 여기시키는 에너지원으로 작용합니다. 우리가 시료를 관찰할 수 있는 것은 광원의 조명 때문이 아니라, 시료 내의 형광물질이 여기광 에너지를 흡수한 후 나타나는 형광현상 때문이다.
따라서 형광현미경의 주요 특징은 광원이 특정 파장 범위 내에서 풍부한 여기광을 전달하여 시험편의 형광 물질이 충분한 강도의 여기광을 받을 수 있다는 것입니다. 한편, 형광현미경에는 적절한 필터 시스템이 장착되어 있어야 합니다. 형광 현미경은 형광 조직화학에 필수적인 도구입니다. 초고압 광원, 필터 세트(여기 및 배리어 필터 포함), 광학 시스템 및 사진 시스템을 포함한 주요 구성 요소로 구성됩니다. 특정 파장의 빛으로 표본을 여기시켜 형광 방출을 유도하는 방식으로 작동합니다.
형광 여기 방법: 파장 범위에 따라 UV 여기(자외선 조명 방법)와 BV 여기(청자색광 방법)의 두 가지 유형으로 분류됩니다. UV 여기 방법은 여기를 위해 400 nm보다 짧은 근자외선을 사용합니다. 이 방법에서는 가시적인 여기광이 존재하지 않습니다. 결과적으로 관찰된 형광은 염료 고유의 형광을 나타내므로 표본의 특정 형광과 배경 조직의 자가형광을 쉽게 구별할 수 있습니다.
BV 여기 방법: 404 nm 및 434 nm를 중심으로 자외선부터 청색까지의 빛을 사용하여 여기를 수행합니다. 이 방법은 검체에 청색광을 조사하기 때문에 형광관측시스템의 차단필터는 청색광을 완전히 차단하면서도 필요한 녹색 및 황색 형광을 충분히 투과시켜야 한다. 이는 형광항체 분석에 사용되는 형광색소에 적용됩니다. 여기광의 최대 흡수 파장은 형광의 최대 방출 파장에 상대적으로 가깝기 때문에 BV 여기 방법에는 날카로운 필터가 필수입니다. 이 접근법에서는 청색광을 여기광으로 사용할 수 있으며, 이를 통해 형광색소의 높은 흡수 효율과 상대적으로 밝은 이미지를 얻을 수 있습니다. 단점은 500 nm 미만의 형광은 감지할 수 없는 반면, 500 nm 이상의 신호는 전체 이미지를 노란색으로 렌더링한다는 것입니다. 형광 항체 분석에서 특이성은 대부분 형광 색소의 특징적인 색상으로 판단됩니다. 따라서 미묘한 특이성을 평가할 때 BV 여기 방법의 단점은 종종 심각한 악영향을 미칩니다.
