형광현미경과 기존광학현미경의 특징 및 비교
형광현미경은 일반 광학현미경과 다릅니다. 일반적인 광원으로 시료를 조명하는 대신 특정 파장의 빛(보통 자외선 또는 청자색광)을 이용해 시료 내 형광물질을 여기시켜 형광을 발산하는 방식이다. 광원에서 나오는 빛은 직접 조명하는 데 사용되지 않고 시료 내 형광물질의 여기 에너지 역할을 한다. 따라서 광원의 조명 때문이 아니라 시료 내 형광 물질이 여기광을 흡수한 후 방출되는 형광으로 인해 시료를 관찰할 수 있습니다. 따라서 형광 현미경의 주요 특징은 광원이 특정 파장의 여기광을 제공해야 시료 내 형광 물질이 충분한 강도의 형광을 방출할 수 있어야 한다는 것입니다. 한편, 형광현미경에는 전용 필터 시스템이 장착되어야 합니다. 형광현미경은 면역형광 조직화학의 기본 장비입니다. 주로 초고압 광원, 필터 세트(여기 및 장벽 필터 포함), 광학 시스템 및 지원 구성 요소로 구성됩니다. 특정 파장의 빛을 사용하여 형광단을 자극합니다.
여기 모드는 파장 범위에 따라 UV 여기 방법(자외선 조사 방법)과 BV 여기 방법(청자색 여기 방법)의 두 가지로 분류됩니다.
UV 여기 방법: 여기에는 400nm보다 짧은 근자외선이 사용됩니다. 이 방법에는 가시적인 여기광이 존재하지 않습니다. 관찰된 형광은 염료의 고유 형광을 나타내므로 표본의 특정 형광과 배경 조직의 자가형광을 쉽게 구별할 수 있습니다.
BV 여기 방법: 자외선부터 청자색까지 404nm 및 434nm를 중심으로 하는 빛으로 여기가 수행됩니다. 이 방법에서는 청색광이 시편에 조사됩니다. 따라서 형광 관찰 시스템의 배리어 필터는 필요한 녹색 및 노란색 형광을 투과시키면서 청색광을 완전히 차단해야 합니다. 이는 면역형광 분석에서 형광색소에 사용됩니다. 형광색소의 최대 흡수 파장은 BV법의 여기 파장에 가깝기 때문에 청색광을 여기광으로 사용할 수 있어 형광색소의 광흡수 효율이 높고 비교적 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다. 단점은 500nm 이하의 파장에서는 형광을 관찰할 수 없고, 500nm 이상의 형광 신호만 이미지에 표시할 수 있다는 점입니다. 면역형광 분석에서 형광색소는 부분적으로 색상으로 식별됩니다. 따라서 미묘한 특이성을 논의할 때 BV 여기 방법의 위 단점은 상당한 영향을 미칩니다.
