미생물 개체수 측정 - 직접 현미경 계수 방식!
I. 목적 요구 사항
1, 적혈구용적률 계산의 원리를 명확히 한다.
2, 헤마토크릿 플레이트를 이용한 미생물 계수 방법을 익히십시오.
II. 기본 원리들
현미경 직접 계수 방법은 정의된 면적과 부피를 가진 특수 슬라이드(세균 계수라고도 함)에 테스트할 시료의 소량의 현탁액을 현미경에서 직접 계수하는 간단하고 신속하며 직관적인 방법입니다. 현재 국내외에서 일반적으로 사용되는 세균 계수기는 혈액 세포 계수 판, Peteroff-Hauser 세균 계수기 및 Hawksley 세균 계수기 등이며 효모, 박테리아, 곰팡이 포자 및 기타 계수 정지에 사용할 수 있으며 기본 원리입니다. 는 ~와 마찬가지로. 후자의 두 가지 유형의 카운터는 총 부피가 0입니다. 커버슬립을 장착한 후02mm3이고 커버슬립과 캐리어 슬라이스 사이의 거리는 0.02mm에 불과하므로 다음과 같은 더 작은 셀이 있습니다. 박테리아는 오일 침지 대물렌즈로 관찰하고 계수할 수 있습니다. 이러한 카운터를 사용하는 것 외에도 일반적으로 우유의 세균학적 검사에 사용되는 현미경으로 직접 관찰한 시야 영역에 대한 도말 영역의 비율을 추정하는 방법도 있습니다. 직접 현미경 계수 방법의 장점은 직관적이고 빠르며 조작이 쉽습니다. 그러나 이 방법의 단점은 결과가 일반적으로 죽은 유기체와 살아있는 유기체의 합이라는 것입니다. 이러한 단점을 극복하기 위한 몇 가지 방법으로는 살아있는 박테리아로 염색된 마이크로챔버 배양(짧은 시간)과 세포질 분열 억제제를 첨가하여 살아있는 유기체만 계수하는 목적을 달성하는 등 몇 가지 방법이 있습니다.
작업 단계
1, 세균 현탁액 준비
멸균 식염수를 사용하여 적절한 농도의 맥주 효모의 박테리아 현탁액을 만듭니다.
2, 거울 계산 챔버
샘플을 추가하기 전에 먼저 계수판의 계수 챔버를 검사해야 합니다. 먼지가 있는 경우 계산하기 전에 청소하고 건조해야 합니다.
3, 샘플 추가
커버슬립으로 덮인 혈구 계수판을 깨끗하고 건조시킨 다음 멸균 모세관 뷰렛을 사용하여 커버슬립 가장자리에서 맥주 효모 현탁액을 흔들어 작은 방울을 떨어뜨려 세균 액체가 모세관 침투에 의해 틈새를 따라 계수 챔버는 자동으로, 일반적으로 계수 챔버는 박테리아 액체로 채워질 수 있습니다. 샘플을 채취할 때 먼저 세균 용액을 잘 흔들어야 합니다. 샘플을 추가할 때 계수 챔버에 기포가 없어야 합니다.
4,현미경 계산
검체를 첨가한 후 5분 동안 방치한 다음 혈구 계수판을 현미경 운반대에 놓고 먼저 저배율로 계수실의 위치를 찾은 다음 고배율로 변경하여 계수합니다. 현미경의 빛의 강도를 적절하게 조정하십시오. 반사경이 있는 현미경의 경우 빛이 한쪽으로 치우치지 않도록 주의해야 합니다. 그렇지 않으면 시야가 계산 챔버 격자선을 명확하게 하기가 쉽지 않습니다. 수직선만 보거나 수평선만 봅니다. 계수하기 전에 세균액이 너무 걸쭉하거나 너무 묽은 것으로 확인되면 계수하기 전에 희석률을 다시 조정해야 합니다. 각 세포당 약 5~10개의 박테리아에 대한 일반적인 샘플 희석 요구 사항이 적절합니다. 각 계수실에 대해 5개의 중간 구획(4개의 모서리와 중앙에 1개의 중간 구획)에 있는 유기체를 선택하여 계수합니다. 그리드 선에 위치한 유기체는 일반적으로 위쪽 및 오른쪽 선에서만 계산됩니다. 효모 출아의 경우 출아체가 모세포 크기의 절반에 도달하면 두 유기체로 간주됩니다. 샘플의 박테리아 함량을 계산하기 위해 두 개의 계수 챔버에서 샘플을 평균값으로 계산합니다.
5. 적혈구용적판 청소
사용 후에는 혈구계산판을 수돗물에 헹구고, 딱딱한 물건으로 씻거나 솔질하지 말고, 스스로 말리거나, 세탁 후 헤어드라이어를 이용해 건조시키십시오. 플레이트를 현미경으로 검사하여 각 구획에 잔류 유기체나 기타 침전물이 있는지 확인합니다. 깨끗하지 않다면 깨끗해질 때까지 세탁을 반복해야 합니다.
