레이저 스캐닝 다광자 현미경의 이점 향상
레이저 스캐닝 다광자 현미경은 광학 현미경에 비해 크게 개선되었습니다. 살아있는 세포, 고정된 세포 및 조직의 깊은 구조를 관찰할 수 있으며, 명확하고 선명한 다층 Z 평면 구조, 즉 광학 단면을 얻을 수 있어 표본의 3차원 고체 구조를 구성할 수 있습니다. 공초점 현미경은 레이저 광원을 사용하여 확대한 후 대물 렌즈의 후면 초점면 전체를 채운 다음 대물 렌즈의 렌즈 시스템을 통과하여 표본 초점면의 매우 작은 지점으로 수렴합니다. 대물렌즈의 개구수에 따라 가장 밝은 조명점의 직경은 약 0.25 ~ 0.8μm 정도이고 깊이는 약 0.5 ~ 1.5μm입니다. . 공초점 크기는 현미경 설계, 레이저 파장, 대물렌즈 특성, 스캐닝 장치 상태 설정 및 표본 속성에 따라 달라집니다. 현장 현미경은 조명 범위와 깊이가 넓은 반면, 공초점 현미경은 초점면의 초점에 초점이 맞춰진 조명을 사용합니다. 공초점 현미경의 가장 기본적인 장점은 두꺼운 형광 표본(50 μm 이상에 도달할 수 있음)을 미세하게 광학적으로 절편할 수 있으며 절편의 두께는 약 0.5~1.5 μm라는 것입니다. 현미경의 Z축 스테퍼 모터를 사용하여 표본을 위아래로 움직여 일련의 광학 단면 이미지를 얻을 수 있습니다. 이미지 정보 획득은 평면 내에서 제어되며 표본의 다른 위치에서 방출되는 신호의 방해를 받지 않습니다. 배경 형광의 영향을 제거하고 신호 대 잡음비를 높이면 공초점 이미지의 대비와 해상도가 기존 현장 조명 형광 이미지에 비해 크게 향상됩니다. 많은 표본에서 많은 복잡한 구조적 구성 요소가 서로 얽혀 복잡한 시스템을 형성하지만 일단 충분한 광학 섹션이 수집되면 소프트웨어를 통해 3차원으로 재구성할 수 있습니다. 이 실험 방법은 세포나 조직 사이의 복잡한 구조적, 기능적 관계를 밝히기 위해 생물학적 연구에 널리 사용되어 왔습니다.
