전자현미경을 위한 생물학적 시료의 준비 및 관찰
현미경의 분해능은 사용되는 빛의 파장에 따라 달라집니다. 1933년부터 등장하기 시작한 전자현미경은 가시광선보다 훨씬 짧은 파장의 전자빔을 광원으로 사용하기 때문에 광학현미경에 비해 얻을 수 있는 분해능이 크게 향상됐다. 광원의 차이는 전자현미경과 광학현미경의 일련의 차이점을 결정하기도 합니다.
전자빔 이미징 원리의 차이와 시료에 작용하는 방식의 차이로 인해 현대 전자현미경은 다양한 유형으로 발전해 왔습니다. 현재 가장 일반적으로 사용되는 것은 투과전자현미경과 주사전자현미경이다. 전자의 총 배율은 1000-1000000 사이일 수 있습니다. 후자의 총 배율은 20~300,000배 사이에서 달라질 수 있습니다. 이 실험에서는 주로 투과 전자 현미경과 주사 전자 현미경의 두 가지 유형의 현미경 샘플 준비를 소개합니다.
2. 장비
1. 대장균(Escherichia coli) 사면균.
2. 용액 또는 시약 아밀아세테이트, 농축황산, 무수에탄올, 멸균수, 2% 인텅스텐산나트륨(pH 6.5-8.0) 수용액, 0.3% 폴리에틸렌 포름알데히드(클로로포름에 용해됨) 용액, 세포 안료 c, 암모늄 아세테이트, 플라스미드 pBR322.
3. 기구 또는 기타 기구: 일반 광학현미경, 구리망, 도자기 깔대기, 비이커, 접시, 멸균 점적기, 멸균 핀셋, 핀, 슬라이드, 계수판, 진공 코팅기, 임계점 건조기 등
3. 작업 단계
(1) 투과전자현미경을 위한 시료 준비 및 관찰
1. 금속메쉬 처리
광학현미경용 샘플을 유리 슬라이드 위에 올려 관찰합니다. 그러나 투과전자현미경에서는 전자가 유리판을 통과할 수 없기 때문에 메시 재료는 일반적으로 캐리어 네트라고 불리는 캐리어로만 사용할 수 있습니다. 캐리어 메쉬는 재질과 모양이 다르기 때문에 다양한 사양으로 나눌 수 있으며, 그 중 가장 일반적으로 사용되는 것은 200-400 메쉬(구멍 수) 구리 메쉬입니다. 구리 메쉬는 먼지를 제거하고 깨끗하게 유지하기 위해 사용하기 전에 처리해야 합니다. 그렇지 않으면 지지 필름의 품질과 표본 사진의 선명도에 영향을 미칩니다. 본 실험에서는 400- 메쉬 구리 메쉬를 사용하는데 다음과 같이 처리할 수 있습니다. 먼저 아밀 아세테이트에 몇 시간 동안 담그고 표백한 다음 증류수로 여러 번 헹구고 무수 에탄올에 담가서 1시간 동안 처리합니다. 탈수. 위의 방법을 적용한 후에도 구리 메쉬가 여전히 깨끗하지 않은 경우 묽은 진한 황산(1:1)에 1~2분 동안 담그거나 1% NaOH 용액에 몇 분간 끓인 후 증류수로 헹구십시오. 물을 여러번 부은 후 무수물에 담가 에탄올에 탈수하여 따로 보관해 주세요.
2. 지지막 준비
샘플을 관찰할 때 캐리어 네트도 구조화되지 않은 균일한 필름 층으로 덮어야 합니다. 그렇지 않으면 작은 샘플이 캐리어 네트의 구멍에서 새어 나올 수 있습니다. 이 필름은 일반적으로 지지필름(support film) 또는 캐리어필름(carrier film)으로 불린다. 지지 필름은 전자 투명해야 하며 두께는 일반적으로 20nm 미만이어야 합니다. 전자빔의 영향 하에서 필름은 구조적 안정성을 유지하고 우수한 열 전도성을 갖기 위해 일정한 기계적 강도를 가져야 합니다. 또한, 지지망은 전자현미경에서 사용되어야 하며, 아래에 가시적인 구조가 없어야 하고, 운반되는 시료와 화학 반응이 없어야 하며, 시료 관찰에 방해가 되어서는 안 됩니다. 그 두께는 일반적으로 약 15nm이다. 지지 필름은 플라스틱 필름(예: 콜로디온 필름, 폴리에틸렌 포름알데히드 필름 등), 탄소 필름 또는 금속 필름(예: 베릴륨 필름 등)일 수 있습니다. 정상적인 작업 조건에서 플라스틱 필름은 요구 사항을 충족할 수 있습니다. 플라스틱 필름 중 콜로디온 필름은 비교적 제조가 용이하지만 강도는 폴리에틸렌 포름알데히드 필름만큼 좋지 않습니다.
