형광현미경 표본 제작 요건
(1) 유리 슬라이드
슬라이드의 두께는 0.8~1.2mm 사이여야 합니다. 슬라이드가 너무 두꺼우면 한편으로는 더 많은 빛을 흡수하지만 다른 한편으로는 여기광이 표본에 모일 수 없습니다. 슬라이드는 매끄럽고 두께가 균일해야 하며 자연발광이 없어야 합니다. 때로는 석영 유리 슬라이드가 필요합니다.
(2) 커버 유리 슬라이드
커버글라스의 두께는 약 0.17mm로 매끄럽고 깔끔합니다. 여기를 강화하기 위해 간섭 커버 유리를 사용할 수도 있습니다. 이는 서로 다른 빛의 파장에 대해 서로 다른 간섭 효과를 갖는 여러 층의 물질(예: 불화마그네슘)로 특별히 설계된 커버 유리입니다. 이는 형광이 원활하게 통과하도록 할 수 있는 반면 반사 여기는 표본을 자극할 수 있습니다.
(3) 시료
조직 조각이나 기타 표본은 여기광이 대부분 표본의 아래쪽 부분에서 소비되는 반면 대물 렌즈로 직접 관찰되는 위쪽 부분은 완전히 여기되지 않으므로 너무 두껍지 않아야 합니다. 또한 셀 중첩이나 불순물 마스킹도 판단에 영향을 미칠 수 있습니다.
(4) 밀봉제
글리세린은 부착제로 흔히 사용되며 자연발광이 없고 무색 투명해야 합니다. 형광의 밝기는 pH 8.5~9.5에서 더 밝아지며 빨리 퇴색되기 쉽지 않습니다. 따라서 글리세롤과 pH 9.0-9.5의 0.5mol/l 탄산 완충액의 동일한 혼합물이 일반적으로 밀봉제로 사용됩니다.
(5) 미러 오일
암시야형광현미경, 오일현미경을 이용하여 검체를 관찰할 때에는 렌즈오일을 사용하는 것이 필요합니다. 위에서 언급한 것처럼 글리세롤로 대체할 수도 있는 특수 제작된 무형광 렌즈 오일을 사용하는 것이 가장 좋습니다. 유동 파라핀도 사용할 수 있지만 굴절률이 낮아 화질에 약간의 영향을 미칩니다.
형광현미경 사용 시 주의사항
(1) 형광 현미경의 공장 매뉴얼 요구 사항을 엄격히 따르고 프로그램을 임의로 변경하지 마십시오.
(2) 검사는 암실에서 실시한다. 암실에 들어간 후 전원을 연결하고 초고압 수은등을 5~15분간 켜줍니다. 광원이 강한 빛을 방출하고 안정화된 후, 눈은 암실에 완전히 적응한 후 표본을 관찰하기 시작합니다.
(3) 자외선에 의한 눈의 손상을 방지하기 위해 광원 조정 시에는 보호안경을 착용해야 합니다.
(4) 검사 시간은 1회당 1-2시간이어야 합니다. 90분을 초과하면 초고압 수은등의 광도가 점차 감소하고 형광도 약해진다. 3-5분 동안 자외선에 노출된 후 표본의 형광도 크게 감소했습니다. 따라서 최대 2-3시간을 초과해서는 안 됩니다.
(5) 형광현미경 광원의 수명은 제한되어 있으므로, 시간을 절약하고 광원을 보호하기 위해 검체를 중앙에서 검사해야 합니다. 날씨가 더울 때는 선풍기를 추가해 열을 발산하고 식혀야 합니다. 새 전구를 교체할 때에는 처음부터 사용시간을 기록해야 합니다. 램프가 꺼졌다가 다시 사용하려면 전구가 완전히 식을 때까지 기다려야 불이 켜집니다. 광원을 여러 번 점화하지 마십시오.
(6) 시간이 지남에 따라 형광이 점차 감소하므로 염색 직후 검체를 관찰하십시오. 검체를 폴리에틸렌 비닐봉지에 4도 보관하면 형광 감쇠 시간을 지연시키고 장착제의 증발을 방지할 수 있습니다.
(7) 형광 밝기의 판단 기준은 일반적으로 4가지 수준, 즉 "1"(형광이 없거나 눈에 보이는 약한 형광)으로 구분됩니다. 플러스 - 선명하게 보이는 형광만 볼 수 있습니다. 플러스 플러스 - 밝은 형광으로 보입니다. 'plus plus plus' - 가시적이고 눈부신 형광.
