위상차 현미경 사용을 위한 몇 가지 참고 사항 및 팁
위상차 현미경의 사용
1) 위상차 장치 설치: 일반 현미경의 집광 렌즈를 제거하고 환형 다이어프램이 있는 집광 렌즈를 일치하는 현미경에 설치합니다. 현미경의 일반 대물 렌즈를 제거하고 위상 판이 있는 대물 렌즈로 교체하십시오. 접안렌즈를 위상차 현미경용 포커싱 접안렌즈로 교체하십시오. 특수 녹색 필터(때로는 필요하지 않음)가 광원의 광 입구에 배치됩니다.
2) 빛 정렬 및 초점: 흰색 원과 검은색 원이 시야에 선명하게 보일 때까지 초점 접안 렌즈와 두께 조정 나사를 조정합니다. 검은색 원은 고정되고 흰색 원은 콘덴서 장치의 나사를 조정하여 움직일 수 있으므로 검은색 원과 흰색 원이 완전히 일치합니다. 포커싱 접안렌즈를 빼서 현미경의 원래 접안렌즈로 교체하여 확인합니다.
위상차현미경 사용상의 문제점 분석
1. 시료 두께의 영향 위상차 관찰을 할 때 시료의 두께는 5μm 이하로 해야 합니다. 더 두꺼운 샘플을 사용하는 경우 샘플의 상위 레이어는 매우 선명하지만 깊은 레이어는 흐려지고 위상 편이 간섭이 발생합니다. 그리고 광산란.
2. 커버 글라스와 슬라이드 글래스의 영향 시료는 커버 글래스로 덮어야 합니다. 위상차 관찰은 또한 슬라이드 유리 및 커버 유리의 유리 품질에 대한 요구 사항이 높습니다. 흠집, 불균일한 두께 또는 요철이 있는 경우 밝은 링 왜곡 및 위상 간섭이 발생합니다. 또한 슬라이드가 너무 두껍거나 너무 얇으면 환형 다이어프램의 밝은 링이 커지거나 작아집니다.
3. 후광 및 퇴색 현상 위상차 현미경의 이미징 과정에서 위상 지연으로 인해 특정 구조가 어두워지면 빛의 손실이 아니라 이미지 평면에서 빛의 재분배 결과입니다. 따라서 어두운 영역에서 분명히 손실되는 빛은 어두운 물체 주위에 밝은 후광으로 나타납니다. 이는 미세구조의 관찰을 방해하는 위상차 현미경의 단점이며 환형격막이 매우 좁을수록 후광 현상이 더 심해진다. 위상차 현미경의 또 다른 현상은 위상차로 관찰할 때 동일한 위상 지연으로 더 넓은 영역의 가장자리에서 대비 손실을 나타내는 음영 효과입니다.
4. 위상 반전 n'n일 때 이미지의 명암 대비가 정반대이며 이를 위상 반전이라고 합니다. 위상차 δ=0일 때 인식할 수 없으며 δ가 증가할수록 대비가 커지고 δ가 일정 값까지 계속 증가하면 위상 반전이 나타납니다. 90% 고흡광도(고대비) 대물렌즈 사용 시 이 변환 값은 약 0.55λ이며, 70% 표준 흡광도 대물렌즈 사용 시 약 0.33λ입니다. . 흡광도 값이 더 높은 대물렌즈를 사용하여 광경로 차이가 더 작은 것을 확인해야 합니다.
