편광 현미경에서 편광판을 교정하기 위한 표준 절차
형광현미경은 일반 광원의 조명 하에서 시료를 관찰하지 않는다는 점에서 일반 광학현미경과 다릅니다. 대신 특정 파장의 빛(보통 자외선, 청자색광)을 사용해 현미경 아래 시료 내부의 형광 물질을 여기시켜 형광을 방출하게 한다. 따라서 형광현미경에서 광원의 역할은 직접 조명하는 것이 아니라, 시료 내부의 형광물질을 여기시키는 에너지원으로서의 역할이다. 우리가 표본을 관찰할 수 있는 이유는 광원의 조명 때문이 아니라, 여기된 빛 에너지를 흡수한 후 표본 내부의 형광물질이 나타내는 형광 현상 때문입니다. 이로부터 형광현미경의 특징은 주로 광원이 특정 파장 범위에서 많은 양의 여기광을 공급할 수 있어 시료의 형광 물질이 필요한 여기광 강도를 얻을 수 있다는 점을 알 수 있습니다. 동시에, 형광현미경에는 상응하는 필터 시스템이 있어야 합니다. 형광 현미경은 형광 조직 화학의 기본 도구입니다. 초고전압 광원, 필터 시스템(여기 및 억제 필터 플레이트 포함), 광학 시스템, 사진 시스템 등의 주요 구성 요소로 구성됩니다. 특정 파장의 빛을 사용하여 시료를 자극하고 형광을 방출합니다.
1. 형광 여기 방법: 빛의 파장 범위에 따라 UV 여기 방법(자외선 조명 사용)과 BV 여기 방법(청자색 빛 사용)의 두 가지 유형이 있습니다. UV 여기 방법은 여기를 위해 400nm보다 짧은 근자외선을 사용합니다. 이 방법은 가시적인 여기광이 없기 때문에 관찰된 형광이 염료 고유의 형광을 나타내어 검체의 특정 형광과 배경 조직의 자기 형광을 쉽게 구별할 수 있습니다.
2. BV 여기 방법: 404nm 및 434nm를 중심으로 하는 자외선부터 청색광까지의 여기를 포함합니다. 이 방식은 청색광을 사용하여 검체에 조사하므로, 형광관측시스템의 차단필터는 청색광을 완전히 차단하고, 필요한 녹색 및 황색 형광을 완전히 통과시킬 수 있는 필터를 사용해야 한다. 형광항체법에 사용되는 형광안료. 여기광의 최대 흡수 파장과 형광의 최대 방출 파장은 상대적으로 가깝기 때문에 BV 여기 방법에 사용되는 필터는 샤프 컷 필터를 사용해야 합니다. 이 방식은 청색광을 여기광으로 이용할 수 있어 형광안료의 흡수효율이 높고, 더욱 밝은 영상을 얻을 수 있다. 단점은 500nm 이하의 형광은 볼 수 없는 반면, 500nm 이상의 형광은 이미지 전체가 노란색으로 보인다는 점입니다. 형광항체법에서는 대부분 형광색소 특유의 색상에 따라 특이성이 결정되기 때문에 미묘한 특이성을 논할 때 위에서 언급한 BV 여기법의 단점이 큰 영향을 미치는 경우가 많다.
