형광 현미경에 대해 얼마나 알고 계십니까?
형광 현미경은 일반적으로 여기 광원으로 고강도 수은 램프를 사용합니다. 필터는 원하지 않는 빛을 걸러내고 형광단을 여기시키는 고강도의 순수한 빛만 남기는 데 사용됩니다. 단색광이 대물렌즈를 통해 샘플에 조사된 후 샘플은 여기되어 빛을 방출(형광)하고 형광 및 여기광은 모두 대물렌즈의 광경로를 따라 되돌아옵니다. 이 경우 여기광을 필터링하기 위해 다이크로익 미러가 필요합니다. , 우리가 보아야 할 형광만 보도록 합니다.
이 형광은 현미경의 광로를 따라 접안렌즈에 도달한 다음 우리의 눈으로 들어와서 형광단이 방출하는 형광을 볼 수 있습니다.
형광 현미경의 사전 점검 및 조정:
(1) 각 형광 관찰 전에 형광 장치의 필라멘트 정렬, 광학 경로 초점, 개구 조리개 및 필드 조리개 설정을 정기적으로 확인해야 합니다.
(2) 필요한 형광 여기/방출 필터 어셈블리가 변환기에 설치되었는지 여부, 형광 현미경 대물 렌즈가 올바르게 구성되었는지 여부, 대물 렌즈 전면 렌즈의 오일 얼룩 및 먼지 제거.
(3) 투과광의 위상차 관찰을 동시에 할 경우 집광기 중심과 대물렌즈 반대쪽 위상차 링의 공액을 확인할 필요가 있다.
(4) 샘플 캐리어(슬라이드 글라스, 커버 글라스 및 기타 도구)가 액체 또는 먼지로 덮여 있는지 여부와 두께가 대물 렌즈의 보정된 작동 거리 범위 내에 있는지 확인합니다. 얇게 썬 샘플은 너무 두껍지 않아야 하며, 바람직하게는 10μm 이하입니다.
(5) 광원에는 자외선이 포함되어 있기 때문에 자외선이 망막을 손상시키는 것을 방지하기 위해 스테이지 전면에 갈색 차광판을 배치합니다.
(6) 전압 불안정은 고압 수은 램프의 수명을 단축하며 광원 전원 공급 장치에는 전압 안정기가 장착되어 있습니다.
(7) 수은 램프의 수명을 연장하기 위해 켜진 후 15분 후에 꺼질 수 있습니다. 수은 램프의 형광 전원이 꺼지면 수은 증기를 다시 시작하여 냉각하고 원래 상태로 돌아가려면 최소 10분을 기다려야 합니다. 그렇지 않으면 램프의 수명에 영향을 미칩니다.
형광 현미경에 의한 이미지 관찰:
(1) 형광 광원을 켠 후 약 5-10분이 지나면 여기광의 강도가 안정되는 경향이 있으며 관찰을 위해 샘플을 로드합니다. 초점을 맞추고 물체를 찾는 과정에서 과도한 여기광으로 인한 시료의 형광 소광을 방지하기 위해 먼저 형광 현미경을 축소하고 개구 조리개로 여기광을 적당한 강도로 조정하거나 ND 필터를 추가하고 정기적으로 샘플 단계를 이동합니다. 미러 이미지를 확인한 후 촬영 및 녹화를 위해 형광 상태로 조정합니다.
(2) 화질 저하에 대한 조정. 샘플 준비 요인 외에도 필요한 조정은 다음과 같습니다.
① DIC 액세서리, ND 필터 등과 같은 이미징 광학 경로에서 차광 또는 차광 장치를 제외합니다.
②형광현미경의 리시버 초점과 조리개 조리개 크기를 재조정한다.
③ 형광 현미경 대물 렌즈의 범위 차이 보정 링을 조심스럽게 조정하십시오.
형광 현미경의 적용 포인트
형광 현미경 검사법은 "화학선 형광" 이미징을 사용합니다. 선택한 여기 파장이 육안으로는 보이지 않는 근자외선 영역(320-400nm)에 있으면 형광의 방출 스펙트럼도 일반 광거울 광원의 평균 파장보다 짧습니다. 개선하다. 고에너지 광자는 전자와 충돌하여 전자가 기저 상태에서 여기 상태로 전이되도록 합니다. 여기 상태의 전자는 매우 불안정하여 기저 상태로 되돌아갑니다. 이 과정에서 열 에너지의 일부가 소비되고 새로운 광자가 방출됩니다. 새로운 광자는 원래 광자보다 에너지가 낮기 때문에 파장이 더 깁니다. 새로운 광자 파장은 입사광의 광자 파장과 다르기 때문에 파장이 다른 두 개의 빛줄기를 일정한 광학적 처리 방법으로 분리하여 방출된 새로운 광자(형광 신호)만 볼 수 있도록 하는 것, 즉, 형광 현미경은 형광 이미지를 봅니다.
